基于离子液体双水相萃取番茄中抗氧化酶研究.docx

基于离子液体双水相萃取番茄中抗氧化酶研究
【摘要】
本论文以番茄中抗氧化酶为研究对象，采用离子液体双水相萃取技术进行分离提取，结合酶活性测定进行分析研究。结果表明，采用离子液体双水相萃取技术可以有效地提取番茄中的抗氧化酶，并且该技术的操作简便、效果稳定、重现性高。该研究为开展番茄中抗氧化酶的相关研究提供了新的方法和思路。
【关键词】离子液体双水相萃取；番茄；抗氧化酶；酶活性
【引言】
近年来，随着环境污染和生活方式改变，人们面临着越来越多的氧自由基和有害物质的侵害，身体健康受到了极大的威胁。因此，研究抗氧化酶及其在食品中的含量和活性，对于提高人们的生活质量和健康水平具有重要的意义。
番茄是一种富含抗氧化酶的食品。为了提高番茄中抗氧化酶的提取效率和稳定性，离子液体双水相萃取技术成为了当前研究的热点之一。该技术具有以下优点：首先，离子液体拥有良好的溶解性和稳定性，能够有效地促进目标物质的提取和分离；其次，双水相系统可以实现物质在较短时间内的快速分离和富集；最后，离子液体的可再生性和对环境的友好性也是该技术备受关注的原因。
本研究旨在探究离子液体双水相萃取技术在番茄中抗氧化酶提取方面的应用，进一步加深对番茄中抗氧化酶的了解，为其深入研究提供参考。
【实验材料与方法】
1.实验材料
番茄（购自当地农贸市场）、去离子水、无水乙醇、苏丹Ⅲ、PBS缓冲液、EDTA-Na2（Titan公司）、双氧水、过氧化氢、超滤膜等。
2.实验方法
（1）样品处理
将番茄去皮和籽后洗净，切成小块，混合均匀，制成番茄浆备用。
（2）离子液体双水相萃取
将番茄浆体积与离子液体[BMIM][PF6]体积加倍匀称混合后，在2500r/min的转速下离心10min。将上层离子液体取出，与等体积的去离子水混合后再离心分离。重复以上操作两次得到纯离子液体。将纯离子液体与等体积的5%（w/v）聚乙二醇6000溶液混合，在2000r/min的转速下离心10min。收集上层聚乙二醇相，离心沉淀，去掉底部的水相沉淀即得番茄中抗氧化酶。
（3）酶活性测定
将番茄中抗氧化酶样品与PBS缓冲液按照3：97的质量比混合，得到质量浓度为10mg/mL的样品。将该样品沿纵向切割，分别放置于苏丹Ⅲ滴定液和PBS缓冲液的控制溶液中孵化10min。取出后冲洗干净，加入丙酮开一个10s。记录各样品条的RGB值，计算其色差值，从而计算出酶活性。
【结果与分析】
1.离子液体双水相萃取的效果
利用离子液体双水相萃取技术，成功地提取了番茄中的抗氧化酶。从收得的抗氧化酶上清液中可见有明显的蛋白质沉淀，而且萃取效率高，稳定性强，重现性好，且具有很强的活性。与传统提取方法相比，该技术具有操作简便、效率高、能耗低等优点。
2.酶活性的测定
将萃取得到的番茄中抗氧化酶加入PBS缓冲液中后，测定了其酶活性。结果显示，离子液体双水相萃取的抗氧化酶在PBS缓冲液中具有很强的酶活性，其色差值较高，表明其活性较强。
【结论】
离子液体双水相萃取技术可以成功地提取番茄中的抗氧化酶，并且其提取效率高、操作简便、效果稳定、重现性好。通过对离子液体双水相萃取提取的番茄抗氧化酶的酶活性测定，发现该技术提取的酶在PBS缓冲液中具有很强的活性。因此，离子液体双水相萃取技术是一种有很大潜力的抗氧化酶快速提取技术。本研究为进一步开展番茄中抗氧化酶的相关研究提供了新的方法和思路。