依达拉奉对心肺复苏小鼠脑的保护作用.docx

依达拉奉对心肺复苏小鼠脑的保护作用DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2013.08.015基金项目：深圳市科技计划项目（201103250）；龙岗区科技创新局基金（YS2011041）作者单位：518172深圳深圳市龙岗区人民医院急诊科（王合金）重症医学科（阳书坤、刘渠）心内科（黄战军）；深圳市人民医院（高占良）；深圳市疾病与预防控制中心毒理室（何建凡）心肺复苏（CPR）后的存活率和神经功能的恢复率依然很低[1]主要的并发症为神经功能损害和多器官功能衰竭[2]。依达拉奉对缺血性脑损伤有保护作用能改善缺血性脑损伤患者神经功能的预后。本研究拟通过检测复苏后小鼠血清和脑组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和S-100蛋白浓度变化从而探讨早期使用依达拉奉对心肺复苏后小鼠脑组织的保护作用。1材料与方法1.1实验动物及分组选择36只雄性、体质量在20～30g之间的清洁级昆明小鼠（深圳市疾病预防与控制中心提供）在室温条件白昼各12h交替、标准饲养1周后再进行相关实验。实验动物随机（随机数字法）分为3组：实验组（依达拉奉组）、对照组和假手术组（健康组）。1.2方法1.2.1模型制备心肺复苏模型的制作参照文献[3-4]进行。小鼠经腹腔注射乌拉坦（1mg/g）麻醉经口腔插22G管机械通气。维持体液平衡在手术之前给予等渗盐水15μl/g。左侧颈动脉插管测量血压（通过压力换能器与BL-420E生物机能实验系统连接以监测动脉压）和心率。左侧颈静脉置管用于给药。心脏骤停模型制备：经食管心室起搏诱发室颤4极5F起搏电极经口插入食管约4cm电极近端与BL-420E生物机能实验系统的电生理刺激输出端相连。先测定心室起搏阈值（通常起搏电压为15～18V脉宽5～8ms）诱发室颤电压应高于起搏阈值3～5V。采用连续快速起博诱发室颤所需参数为：电压20V、脉宽10ms、频率20Hz。当起搏90s后暂停起搏并观察1～2s如心电图显示起搏诱发出来的室颤自动转律时应立即再起搏30s直至诱发出的室颤持续存在、或出现无脉性电活动或一条直线（无心电活动）为止通常需要起搏90～180s不等。心脏骤停成功诱导标准为动脉血压消失和心电图证实出现心搏停止。在心搏停止期间机械通气停止3min。心搏停止3min后予以胸心外按压。人工手法进行胸外心脏按压频率200次/min按压深度为小鼠胸廓前后径1/3。同时给予肾上腺素（0.4μg/g）必要时给予2J双相波电除颤。同时恢复机械通气。机械通气潮气量为12μl/g呼吸频率为150次/minFiO2为1.0。当自主循环恢复后呼吸频率减少为130次/min同时FiO2调整为0.4。CPR不成功的标准心肺复苏10min后仍无生命体征。肾上腺素在CPR过程中最大剂量为重复使用3次。1.2.2给药方法心肺复苏成功后实验组立即给予静脉注射依达拉奉注射液3μg/g对照组给予注射等量的生理盐水。假手术组只进行相关手术操作不制备心肺复苏模型。继续其他相关治疗。1.2.3小鼠血清和脑组织匀浆SOD、MDA和S-100蛋白含量的测定复苏后12h后全部处死所有小鼠并采取断头法采取小鼠血液3ml3000r/min离心15min取上清液-70℃冰箱保存批量检测。取血后迅速打开大脑取一侧脑组织以脑组织（mg）：生理盐水（ml）=10∶1的比例在盛有冰块的器皿中用匀浆机研磨成脑匀浆4℃下3000r/min离心15min取上清液进行上述指标检测。用化学比色法检测SOD、MDA浓度（试剂购置美国Beckman公司）。使用酶联免疫吸附法进行血清学S-100蛋白含量测定（试剂购置南京建成生物有限公司）。上述操作严格按照试剂操作说明操作。1.2.4脑细胞组织病理学观察取一侧大脑半球置10%福尔马林溶液固定24h。系列酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋常规制作石蜡切片苏木素-伊红（HE）染色显微镜下观察大脑皮层神经细胞学病理变化。1.3统计学方法计量资料均以均数±标准差（x±s）表示运用统计软件SPSS10.0进行分析包括单因素方差分析、多组均数两两比较的Bonferroni法或Tamhane法检验和Pearson相关分析。以P2结果2.1复苏后小鼠心电图复苏后小鼠心电图见图1。图1复苏后小鼠心电图2.2脑组织病理学变化假手术组大脑皮层神经细胞核大形态规则核仁明显尼氏小体可见形态完整。对照组大脑皮层细胞核浓缩核形态多样核仁不清尼氏小体未见可见