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生物技术制药
第一章绪论
药学一级学科分类：药物化学、药剂学、药理学、药物分析、生药学及微生物与生化药学二级学科

★生物技术与生物技术药物的概念
生物技术药物的分类
按用途分类：治疗药物、防止药物、作为诊断药物(免疫诊断试剂、酶诊断试剂、器官功能诊断药物、放射性核素诊断药物、诊断用单克隆抗体(McAb)、诊断用DNA芯片)
按作用类型分类：细胞因子类药物、激素类药物、酶与辅酶类药物、疫苗、单克隆抗体药物、反义核酸药物、RNA干扰(RNAi)药物、基因治疗药物
按生化特性分类：多肽类药物、蛋白质类药物、核酸类药物、聚乙二醇(PEG)化多肽或蛋白质药物
★生物技术药物的特性
理化性质特性：相对分子量大、结构复杂、稳定性差
药理学作用特性：活性与作用机制明确、作用针对性强、毒性低、体内半衰期短、有种属特异性、可产生免疫原性
生产制备特性：药物分子在原料中的含量低、原料液中长存在降解目的产物的杂质、制备工艺条件温和、分离纯化困难、产品易受有害物质污染
质量控制特性：质量标准内容的特殊性、制造项下的特殊规定、检定项下的特殊规定(原液、半成品及成品检定等等)

第二章基因工程制药
蛋白类药物的特点：结构确证不完全性、具有种属特异性、多功能性、免疫原性
临床前安全性评价的特殊性：蛋白类药物安全性担忧的性质和来源；受试物的纯度；相关动物的选择；给药剂量的选择；免疫原性；遗传毒性和致癌性(一般不进行常规的遗传毒性实验)；药代动力学
真核细胞表达制品的安全性问题：生产细胞DNA残留的影响、生产用血清的影响
基因工程药物稳定性研究的相关问题：药物浓度、温度、湿度和水分、氧、光照、pH
基因工程药物的缺陷：生物运用度低，半衰期短；异体蛋白具有免疫原性
基因工程菌的修饰改造方法：构建突变体、构建融合蛋白、PEG修饰(减少免疫原性、增长水溶性、延长t1/2)
基因工程制药基本环节
上游阶段：制备目的基因→构建重组质粒→构建工程细胞
下游阶段：培养工程细胞→分离纯化产物→除菌→半成品、成品检定→包装

基本工具：目的基因、各种酶(切割酶、连接酶、修饰酶等)、载体、宿主细胞
酶切结果：5’粘性末端、3’粘性末端、平头末端
1U核酸内切酶的酶活性：指在最佳反映条件下反映1小时，完全水解1mg标准DNA所需的酶量
影响限制性内切酶反映的因素：
DNA样品的纯度：
DNA的甲基化限度：核酸限制性内切酶不可以切割甲基化的核苷酸序列。在基因克隆中要使用甲基化酶缺陷型细菌菌株制备质粒DNA。
酶切反映的温度
DNA的分子结构
反映缓冲液组成
反映时间、反映体积等
工具酶
核酸限制性内切酶：辨认、水解外源的双链DNA分子上特定的核苷酸序列。重要存在于原核微生物中。
同裂酶：指来源不同，辨认序列相同的酶；进行同样的切割，产生相同的末端
同尾酶：来源不同，辨认序列不同，但产生相同的粘性末端
DNA甲基化酶：具有宿主专一性，对宿主自身DNA上特定核苷酸进行甲基化修饰，避免被自身限制性内切酶水解
DNA连接酶
T4噬菌体连接酶：连接双链DNA切口，或带粘性末端或平头末端的DNA片段
大肠杆菌DNA连接酶：连接双链DNA切口，或带粘性末端的DNA片，不能连接带平头末端的DNA片段
聚合酶：以DNA或RNA为模板，将核苷酸连续加至3’-OH末端，合成方向为5’→3’。DNA聚合酶、RNA聚合酶
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ：5’→3’DNA聚合酶活性；5’→3’DNA外切酶活性；3’→5’DNA外切酶活性；RNAH酶活性
Klenow酶：不具有5’→3’DNA外切酶活性
T4噬菌体DNA聚合酶：不具有5’→3’DNA外切酶活性。外切酶活性比Klenow酶强200倍，对单链DNA作用强于双链DNA
T7噬菌体DNA聚合酶：不具有5’→3’DNA外切酶活性
TaqDNA聚合酶
反转录酶：催化以RNA或DNA为模板，合成DNA；具有RNAH酶的活性
末端脱氧核苷酸转移酶：催化dNTP沿5’→3’聚合，逐个加于线性DNA分子的3’末端；不需要模板

载体：(vector)来源于质粒、噬菌体或病毒的DNA分子，可供插入或克隆目的基因或DNA，并具有运载外源DNA导入宿主细胞的能力。
质粒载体：共价闭合环状DNA(cccDNA)；开环DNA(ocDNA)；线状DNA(lDNA)
质粒的三个重要性质：遗传传递的能力；遗传互换的能力；不相容性
用于克隆的质粒的三个要素：复制子、选择标记、多克隆位点
常用质粒载体：克隆载体、表达载体、突变载体、报告载体
λ噬菌体载体：插入型载体、置换载体
来源于噬菌体DNA，因可以插入较大DNA片段，常用于构建基因组文库和cDNA文库。

目的基因的常用制备方法
化学合成法：前提：基因的DNA的序列已知。小于100bp的片段：直接合成，最常用固相亚磷酸三酯法。大片段目的