实验三--显微镜油镜的使用及细菌形态观察.ppt

实验三油镜使用和细菌形态观察一、实验目的二、显微镜及油镜使用原理图1-1-2光学显微镜的成像原理显微镜的放大倍数和分辨率1.放大倍数：物镜放大倍数×目镜放大倍数2.显微镜的分辨率:是表示显微镜辨析两点之间距离的能力。可用公式表示为：
D=λ/2n·sin(α/2)
式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。：可见光的波长（平均0.55m)n:物镜和被检标本间介质的折射率。：镜口角（即入射角）。油镜使用的原理油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。
2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度
3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。
4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。
5.油镜使用结束后，物镜用擦镜纸擦三遍：第一遍擦去多余的香柏油；第二遍擦镜纸蘸上二甲苯再擦镜头；第三遍再用干净的擦镜纸擦去多余的二甲苯。
6.显微镜应存放在阴凉用擦镜纸擦干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。三.显微镜油镜观察操作方法

在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到最合适的观察点。
一、实验目的
进一步熟悉使用油镜观察微生物的方法，初步认识细菌的基本形态和特殊结构特征二、观察内容
基本形态：杆菌，球菌（注意大小、染色性、排列）
特殊结构：鞭毛，芽胞，荚膜（先找到菌体，再仔细观察特殊结构）杆菌（大肠杆菌，G-）（三）革兰氏染色二、革兰氏染色的工作原理根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的结构差异来达到染色的目的的。
先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的蓝紫色；
然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
然后再用乙醇脱色处理.
由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘不易被洗脱而保留在细胞内，复染时仍保持蓝紫色。
而革兰氏阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时类脂被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫—碘复合物被洗脱，复染时细胞被染上复染剂的颜色（红色）。
大肠杆菌三、革兰氏染色的操作方法
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一小环培养24小时的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌体于生理盐水中涂片（，分别于斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜），把菌液充分涂开，使其分布均匀。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不可过于浓厚
载玻片染色前必须固定细菌，其目的是：
一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。
二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。
⑵干燥：把上面涂好的片于室温下自然干燥。
⑶涂面朝上，在火焰上方过几次以热固定菌体（此操作的目的是使得细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上）。固定时通过火焰1—2次即可。
注意：不可过热，以载玻片不烫手为宜，温度过高会改变甚至破坏细胞形态。
⑷初染：滴数滴结晶紫于菌膜上（以刚好完全覆盖菌膜为宜）初染1--2分钟min，水洗。
⑸媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。⑹脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片倾斜，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30s，立即用水冲净酒精。
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
⑺复染：用番红液染1—2min,水洗。
⑻镜检：干燥后（室温下晾干），置油镜观察（先在低倍镜，然后在油镜下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
注意：以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
（9）同法在一载玻片上以大肠杆菌与金黄色葡萄球菌混合制片，作革兰氏染色对比。本实验每人做一张。
实验报告中要画图表示结果。思考题一、实验目的

熟悉芽胞染色的方法二、芽胞染色的原理三、芽孢染色法步骤
(1)取37℃培养24h～36h的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定。
(2)于载片上滴入3～5滴5％孔雀绿水溶液。
(3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计算时间约4～5min。加热过程