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茵陈内生细菌的分离鉴定与抑菌活性成分分析
茵陈（InulaheleniumL.）是一种常见的草本植物，具有广泛的药用价值。茵陈内生细菌是一种具有潜在生物活性的微生物资源，其抑菌成分可作为植物保护剂、食品防腐剂和医药化学药物等领域的重要原料。
一、茵陈内生细菌的分离鉴定
（一）样品的采集和处理
采集茵陈根部样品，将其表面用70%的乙醇或0.1%的次氯酸盐消毒30s-1min，然后再用无菌PBS洗涤2-3次，并在干净的操作台上将其分成细小的无菌样品。将样品放入含有30%岛拓乳和15%甘油的无菌离心管中，然后在室温下储存备用。
（二）内生菌的分离培养
从茵陈样品中分离内生菌方法有许多，本文采用接种菌株后用香菜叶法筛选细菌的方法。接种菌株为无菌的茵陈根部样品切片。在LB寒天板上摆上1-2片茵陈切片，使用无菌针挑选易于分离的菌落茵陈内生菌，再用香菜叶法筛选细菌。优先挑选对香菜叶子产生抑制圆形区域的菌落，然后在LB液体培养物中生长。所有菌株都在37℃下培养过夜。
（三）菌种的鉴定
采用柯霍韦法进行常规细菌分类。首先分离菌落，然后进行通气培养和糖筛选，最后通过16SrRNA基因序列分析进行确定。
二、茵陈内生菌的抑菌活性成分分析
（一）菌株的培养与提取
在10ml含有10g/L蛋白胨、5g/L酵母粉和10g/L葡萄糖的液体培养物中，以1%菌落计数均匀分布，37℃震荡培养24h。取300ml菌液，用180ml氯仿进行液液萃取。将混合液不断旋转，直到氯仿液上浮。分离上层的氯仿液，稍加压缩并在低温干燥的条件下将其转移到5ml甲醇中。
（二）菌株的抑菌活性实验
采用双层平板法测定茵陈内生细菌菌株对真菌和细菌的抑制作用。
抑菌实验流程：
1.准备琼脂平板和加拿大白羊木菌欠尿菜菌种和枯草杆菌两菌种。
2.在准备好的琼脂平板上涂菌，待培养后在平板上形成一层薄膜。
3.用无菌拔刀从预处理好的液体菌液中取一定量的菌液，接种于琼脂平板表层中心位置。
4.将加拿大白羊木菌欠尿菜菌种和枯草杆菌两菌种装入平板分券中进行对照。
5.置于37℃下恒温培养箱中，观察并记录菌落的增长情况。
（三）抑菌活性成分的分析
采用液相色谱法分离和鉴定具有抑菌活性的茵陈内生细菌中的主要成分。本实验使用柱前衍生化法和高效液相色谱（HPLC）法，通过景天酸的自由碱或孪晶体进行分离和纯化。
三、结论
本文采用香菜叶法对茵陈内生菌进行了分离筛选，并通过确认16SrRNA基因序列进行分类。抑菌活性成分分析表明，茵陈内生细菌菌液对加拿大白羊木菌欠尿菜菌种和枯草杆菌两菌种具有明显的抑制作用，可能具有广泛的抗菌和抗病毒应用前景。在进一步研究中，可以使用更多灵敏度较高的检测方法对菌株进行分析，以进一步探索其潜在的生物活性成分。