霉菌的分离纯化和鉴定.ppt

霉菌的分离、纯化与鉴定怎样鉴定微生物呢？分离资源微生物的基本原则总思路流程一、微生物资源的分布及样本的采集二、样品的预处理三、初筛⑵常用培养基

◆细菌——牛肉膏蛋白胨培养基（肉汤培养基）；

◆放线菌——高氏一号培养基；

◆霉菌——马铃薯葡萄糖培养基（PDA）、查氏酵母膏琼脂培养基(CYA)、
麦芽汁琼脂培养基(MEA)、甘油硝酸盐琼脂培养基(G25N)、
察氏培养基(CA)、孟加拉红培养基、豆汁培养基、其他；2、分离方法介绍⑵用液体培养基获得纯培养3、培养条件四、复筛初筛与复筛的区别：

◆初筛是指从大量的菌落中随机挑取进行摇瓶试验并通过检测得到一些较优菌株；

◆复筛是指将初筛得到的较优菌株再进行多次摇瓶实验验证其效价和传代稳定性，并从中得到一两个或少数几个最优的菌株；五、形态学观察⑵分类

目前，真菌学仍然是微生物学的薄弱环节，还有待进一步深入研究。在系统学方面，受到公认的分类体系不多。

真菌的类群：

接合菌纲：代表种—毛霉、根霉
子囊菌纲：代表种—酵母菌、羊肚菌
担子菌纲：代表种—鹅膏菌、伞菌
卵菌纲：代表种—异水霉属
半知菌纲：代表种—青霉属、曲霉属、假丝酵母

真菌：Smith、Alexopoulos、Ainsworth分类系统代表性霉菌：
①毛霉属
②根霉属
③曲霉属
④青霉属
⑤脉孢菌属
⑥赤霉菌属根据菌丝中是否存在隔膜，可把霉菌菌丝分成两种类型：
无隔膜菌丝：无隔膜，整团菌丝体就是一个单细胞，其中含有多个细胞核，这是低等真菌所具有的菌丝类型；
有隔膜菌丝：有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝体由很多个细胞组成，每个细胞内有1个或多个细胞核。在隔膜上有1至多个小孔，使细胞之间的细胞质和营养物质可以相互沟通，这是高等真菌所具有的菌丝类型；生长在固体培养基上的霉菌菌丝可分为三部分：

①营养菌丝：深入培养基内，吸收营养物质的菌丝；
②气生菌丝：营养菌丝向空中生长的菌丝；
③繁殖菌丝：部分气生菌丝发育到一定阶段，分化
为繁殖菌丝，产生孢子。几种常见的霉菌形态⑷丝状真菌的生活史2、菌落形态霉菌在孟加拉红培养基上的典型特征

链霉菌
甘油硝酸盐琼脂：气丝微褐色。基丝无色至淡黄色，在大部分所
用培养基内无可溶色素；
葡糖天冬素琼脂：气丝初白色，后粉褐色。基丝无色至淡褐色；
淀粉琼脂：气丝白色至微褐色带微粉色彩。基丝无色至乳脂色带
淡褐色彩；
苹果酸钙琼脂：气丝白色。基丝无色。营养琼脂：气丝少，白色。
基丝乳脂色。斜面接种法3、霉菌的制片观察霉菌的小室培养

㈠培养小室准备及灭菌
在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，在其上面放一个U型玻棒，在U型玻棒上放一块载玻片和四块盖玻片，盖上皿盖，做八个,留两个空培养皿,包扎后于121℃灭菌30min,烘干备用。
㈡PDA培养基准备
在无菌箱中，取已灭菌的马铃薯琼脂培养基注入另两个已灭菌培养皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成1cm~1.2cm×1cm~1.2cm的方形琼脂块，将其移至培养小室的载玻片上，载玻片两端各放置一块。
㈢接种
无菌操作用接种环挑取很少量的孢子接种于琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。
㈣培养
通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加3ml灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上盖皿，于28℃培养。
㈤镜检
从培养箱中取出载玻片在低倍镜下观察四种霉菌菌丝体及孢子的形态特征，必要时换高倍镜。
*注意事项
在载玻片培养观察中，注意无菌操作，接种量要少并尽可能将分散孢子接种在琼脂块边缘，避免培养后菌丝过于密集影响观察。2、染色方法染色效果2、微生物快速鉴定和分析技术Enterotube系统

该装置可做下列15种试验：
葡萄糖产酸产气、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶、硫化氢、靛基质、乳糖和卫矛醇发酵、苯丙氨酸脱氨酶、尿素酶和柠檬酸盐、侧金盏花醇、阿拉伯糖、山梨醇和V.P试验等试验。查阅专门设计的结果判定表。㈡快速、自动化微生物检测仪器和设备全自动微生物鉴定系统举例重力加样技术七、分子生物学手段——18SrRNA真核生物基因组中编码核糖体的基因包括28SrDNA、5SrDNA、18SrDNA和5.8SrDNA4种,它们在染色体上头尾相连、串联排列,相互之间由间隔区分隔；

其中18S、5.8S和28SrDNA基因组成一个转录单元,三者高度保守,适合于较高等级水平的生物群体间的系统分析,其间的间隔区为内转录间隔区(ITS),包括ITS1及ITS2两部分,由于进化相对迅速而具多态性,因而适合于等级水平较低的系统学研究。

真菌鉴定：工作经验+时间=鉴别困难；

rDNA-ITS多态性(包括长度多态性和序列多态性)的序列分析,可以从核酸序列中获得信息来反映生物亲缘关系与分类情况；系统发育树八、菌种保藏其他方法附：霉菌孢子悬液的制备九、参考文献谢