免疫测定方法学和临床应用.ppt

免疫分析技术简介
乙肝病毒标志物定性、定量检测常见问题
抗HCV检测问题
ANA.ENA检测问题
TP-Ab检测问题
TB-Ab检测问题免疫分析技术放射免疫的创立放射免疫的精髓放射免疫面临的挑战新技术的挑战标记免疫方法自动标记免疫分析的优点乙型肝炎病毒定性？定量？定性测定结果确定的依据定性免疫测定的CUT-OFF值与灰区SD1=0.019SD2=0.628可疑阳性处理原则定量测定结果的依据定性测定与定量测定分别Elecsys与酶免法的主要区别丙型肝炎的实验室诊断一、抗-HCVIgG检测酶联免疫吸附实验(Enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)HCV不能体外培养,大量HCV天然抗原几乎得不到.目前主要用基因工程表达和多肽合成方法得到。
用什么区段的丙肝病毒抗原蛋白？如何选择各种抗原合适的比例？是保证HCV试剂测出样品中所有的抗-HCV抗体的关键。
抗体
第一代抗-HCV检测系统主要缺陷是：

灵敏度低,漏检率较高：C100只含363个氨基酸,只代表整个HCV抗原抗体系统的一小部分；
抗体检出时间较晚：不适于早期诊断。
非特异性反应较高：使用的抗原含SOD融合蛋白,因此,当人体存有抗-SOD时常常出现假阳性。

第二代抗-HCV检测系统不足：

由于重组基因多肽抗原中仍有SOD多肽,所以仍存在抗-SOD造成的假阳性问题,于是激发人们建立人工合成肽段检测抗-HCV的新试剂。第三代抗-HCV检测系统
目前我国多采用第三代抗-HCVELISA试剂,其敏感性超过99%,虽然目前缺乏判断其敏感性的金标准,但对于免疫功能正常的HCVRNA阳性感染者,抗-HCV检出率也高于99%。
补充/确认实验:重组免疫印迹(RIBA)因为HCV的各种抗原分别被单独固化在载体的不同位置上,因此,该项检测可以区分待测样品对HCV不同抗原的不同反应。
目前RIBAHCV已经得到FDA的认可,成为抗-HCV确认的标准。
临床意义：RIBA阳性的患者中75-80%为病毒血症(HCVRNA);RIBA阳性而血清中没有HCVRNA时提示可能为既往感染。实时荧光监测PCR

检测原理：在PCR扩增反应管内加入了标记有两种染料的针对靶序列的探针,每当一次扩增反应中一条探针与靶序列退火结合后,整个反应体系就会增加一个单位的荧光.从而得出每一次扩增循环结束后产物的量.临床意义：

特异性强：抗-HCV阳性并不能代表现症感染,丙型肝炎的诊断标准是HCV-RNA.
敏感性高：可发现抗-HCV阴性者HCV感染.
阳性出现早：在“窗口期”没有抗-HCV产生,但可检测出RNA.
可指导用药：为疗效观察及预后判断提供指标.与HBVDNA相比，HCVRNA检测更为复杂和困难,检出率低:

血清中病毒含量低,且有一定波动,呈间歇阳性;
易被RNA酶降解;
HCVRNA受进食的影响,HCV易与血中脂质及脂蛋白结合,致使其检出率降低;
二次PCR,其中任何步骤的问题均易影响其检出。
应用EIAS/CO比值报告抗-HCV结果

ANAENA测定ANA.ENA-Abs需注意问题关于标准带的误差梅毒螺旋体(TP)