血栓与止血检验的基本方法医学PPT课件.ppt

血栓与止血检验基本方法血管壁的正常结构包括三层：内层、中层和外层
内层：内皮细胞+基底膜
内皮细胞管壁有肝素类物质
内皮细胞内含细胞器
（棒状小体vWF和t-PA，TM，AT-Ⅲ,PAI-1等）
中层：平滑肌细胞（脉细血管无此层）
外层：结缔组织血管内皮细胞检验血浆血管性血友病因子抗原vWF:Ag，LPEITA法参考值41.1%～125.9%（O型）；61.3%～157.8%（A+B+AB型）
O型人群明显低于A+B+AB型人群血管性血友病因子抗原测定主要用于血管性血友病的诊断和鉴别诊断
1.减低见于血管性血友病（vWD），是诊断vWD及其分型的重要依据
2.升高见于血栓性疾病，如急性冠脉综合征（ASC）、心肌梗死、脑血管病变、妊娠高血压综合征、肾小球疾病等，同时也见于剧烈运动后，肾上腺素受体被兴奋等。

应用评价以前vWF：Ag定量常采用免疫火箭电泳，由于操作较为复杂，现在少用。ELISA常用于定量检测vWF：Ag，但是胶乳增强的免疫比浊法更为简便快速，而且可以在全自动血凝仪上进行测定。原理将抗人凝血酶调节蛋白（Thrombomdulin,TM）单克隆抗体包被于聚苯乙烯放免小杯中，样本中的TM结合于包被的放免小杯上，加入125I-抗人TM单抗，根据结合的125I放射性强度计算出样品中TM的含量。TM:Ag的水平升高见于血栓性疾病，如糖尿病、心肌梗死、脑血栓、深静脉血栓形成（DVT）、DIC等。
降低见于TM缺乏。第二节血小板止血作用及检验类别血小板功能的实验室检查应用评价
本试验是检测血小板功能的基本试验之一，试验简便、快速，成本低廉，在临床上开展比较广泛。
血小板聚集率减低：见于血小板无力症、血小板贮存池病、血管性血友病、巨大血小板综合征、低（无）纤维蛋白原血症、肝硬化、尿毒症、维生素B12缺乏症、细菌性心内膜炎、急性白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性疾病、特发性血小板减少性紫癜、服用抗血小板药物等。
血小板聚集率增高血液高凝状态和（或）血栓形成性疾病，如动脉粥样硬化性心脏病、糖尿病、肾小球肾炎、肾病综合征、心脏瓣膜置换术后、深静脉血栓形成、高脂饮食、口服避孕药和吸烟等。血小板膜糖蛋白（Glucoprotein，GP）是血小板功能和血小板与其他活性物质作用的基础，一些糖蛋白如GPIa、GPIb、GPIIb、GPIIIa等已被确定为血小板特异抗原。
GP分子数量或结构异常均可导致出血或血栓形成。
活化血小板与静止血小板相比，GP的种类、结构、含量等亦呈现显著变化。
多采用流式细胞术（FCM）分析血小板膜糖蛋白的表达。血小板自身抗体包括：
血小板相关免疫球蛋白（plateletassociatedimmunoglobulin，PAIg）（包括PAIgG、PAIgA、PAIgM）特异性膜糖蛋白自身抗体
药物相关自身抗体
抗同种血小板抗体
血小板自身抗体测定表达有助于判断血小板减少的原因。检测血小板免疫相关球蛋白的常用方法为ELISA及流式细胞术。特发性血小板减少性紫癜（ITP）：
90%以上的病人PAIgG增加，同时测定PAIgA、PAIgM及PAC3阳性率达100%。
ITP病人在皮质激素治疗后，PAIgG不下降可作为切脾的指征。
ITP疗效监测指标，治疗有效上述指标下降，复发则增加。第三节血液凝固及检验(一)血浆凝血酶原时间测定（PT）
1.原理
在受检血浆中加入足量组织凝血活酶（即TF）浸出液和和适量Ca2+离子后，血浆凝固所需的时间称为血浆PT。
2.参考值
(1)平均为12s±1s,男性：11s～13.7s；
女性：11s～14.3s，超过对照3s以下为异
常。
(2)PT时间比值（PTR）=被检血浆PT（s）/正
常参比血浆PT（s），宜用多份正常血浆PT
的几何均数参考值为1.00±0.15
(3)国际标准化比值(INR)=PTR[S]
参考值因国际敏感度指数[S]而异。INR：需先求得所用组织凝血活酶的国际敏感度指数[S]，是所用组织凝血活酶与已知参比品相比较的一个参数。是用多份凝血因子水平不同的血浆（包括正常人和口服抗凝剂患者的血浆），用参比品测得它们的logPT，再用待标定的组织凝血活酶测得它们的logPT，以前者为纵坐标，后者为横坐标作图，经回归求得直线斜率。即待标定的组织凝血活酶的[S]=已知[S]×斜率。[S]值越低，试剂对有关凝血因子降低的敏感度越高。再按下式求得INR：INR=PTR[S]3.临床意义：是外源性凝血途径的筛选试验。
(1)PT延长
①Vitk缺乏：Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ统称为依赖Vitk凝
血因子。Vitk↓、因子↓→PT↑。
②抗凝治疗，香豆素类抗凝药物与Vitk化学结
构相似，竞争性拮抗，使PT↑。
③肝病：肝脏是合成除组织因子（Ⅲ）、钙（Ⅳ）
及Ⅷ因子外其他因子的主要场所，肝受损→