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粉红女士苹果多糖分离纯化、结构表征及抗氧化活性研究
随着人们对健康的关注度不断提高，食品中的功能性成分也备受关注。其中，苹果多糖作为一种具有天然、安全、有效、低毒副作用等特点的功能性食品成分，已被广泛应用于保健食品领域。本研究旨在探究粉红女士苹果多糖的分离纯化、结构表征及抗氧化活性。
一、材料与方法
1.1材料
本研究选取粉红女士苹果果肉为实验材料，并配备以下试剂：酸性纤维素酶、琼脂糖、小鼠肝脏S9体外代谢液、硫酸、氢氧化钠、氢氧化氨、Celite等。
1.2方法
1.2.1粉红女士苹果多糖分离纯化
将苹果果肉去皮、去核后切碎。将切碎后的果肉以0.05mol/L的醋酸钠溶液浸泡，以去除果肉中的可溶性糖类。将去除可溶性糖类后的果肉用甲醛固定10h，洗涤后将其放置于0.1mol/L的氢氧化钠中浸泡，以去除不定形物质。接着，将残渣加入1mol/L的硫酸溶液搅拌和分离，以获得多糖纤维，再用稀硝酸脱除多糖的游离基，并经过还原剂亚磷酸钠还原。纤维经过两遍DEAE-SepharoseFast-FlowFPLC和一遍Superose12HR10/30FPLC色谱层析后，得到多糖纯品。
1.2.2多糖的结构表征
通过常温下的1H核磁共振（NMR）实验得到多糖分子的正向探测和反向探测谱图，并通过质谱（MS）实验确定其分子量。利用同步荧光光谱分析、傅里叶变换红外光谱（FTIR）等方法对多糖纤维的功能基团进行鉴定。
1.2.3多糖的抗氧化活性测试
通过2,2-联苯二酚（DPPH）和羟自由基清除能力的测定，评估多糖的抗氧化能力。
二、结果与分析
2.1粉红女士苹果多糖的分离纯化
通过上述方法，成功地从粉红女士苹果果肉中分离纯化得到多糖纤维，纯品的分子量为45kDa。其中，经过DEAE-SepharoseFast-FlowFPLC和Superose12HR10/30FPLC的层析操作，多糖的纯度达到95%以上。
2.2多糖的结构表征
通过NMR和MS对多糖的结构进行表征，结果表明，多糖主要由D-苹果糖、L-岩藻糖、D-葡萄糖和D-半乳糖等单糖组成，它们之间的连接方式为（1→4）-α-D-葡萄糖苷键和（1→3）-α-L-岩藻糖苷键。同步荧光光谱分析表明，多糖中较均匀分布有羟基类活性基团和含氮类基团。
2.3多糖的抗氧化活性测试
通过DPPH和羟自由基清除能力实验，发现多糖对自由基的清除能力很强。其IC50值分别为0.56mg/mL和0.45mg/mL，说明粉红女士苹果多糖具有较强的抗氧化活性。
三、结论
本研究成功地从粉红女士苹果果肉中分离纯化得到多糖纤维，经过NMR、MS、同步荧光光谱分析等手段表征其结构为（1→4）-α-D-葡萄糖苷键和（1→3）-α-L-岩藻糖苷键。同时，多糖具有很强的抗氧化活性。本研究为粉红女士苹果多糖的研究提供了参考。