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白及小分子热激蛋白BsHsp17.3基因的克隆与表达分析
概述
小分子热激蛋白（sHsp）是一类保守的热激蛋白，它们表达在各种生物体中并参与多种生理过程。本研究旨在从白及中克隆并分析一个小分子热激蛋白基因，其中包括其基因的克隆、序列分析、基因表达特征及其在逆境响应中的作用，以期为进一步理解该类热激蛋白的功能提供基础。
材料与方法
材料：白及,RNA,TaKaRaPrimeScript™RT-PCRKit,TaKaRaSYBRGreenqPCRMix,sHsp17.3全长cDNA序列。实验操作包括RNA小提取、反转录、PCR扩增、克隆、序列分析和实时荧光定量PCR（qPCR）。
结果
利用sHsp17.3的保守序列合成了引物，并采用PCR技术从白及中克隆到了完整的sHsp17.3基因，其长度为674bp。序列分析表明，该基因包含6个内含子和7个外显子，其中起始位点和终止位点分别为ATG和TAA，并编码了一段223个氨基酸的蛋白。
qPCR分析表明，在高温（42℃）、低温（4℃）、干旱、高浓度NaCl和氧气缺乏等逆境条件下，sHsp17.3基因的表达模式具有明显的差异。在高温和氧气缺乏下，其相对表达量分别高达3.8倍和7.2倍，而在低温、干旱和高浓度NaCl下仅稍有上升。此外，该基因在叶片和茎中表达量较高，在根中表达量较低。
讨论
本研究从白及中克隆并表征了一个小分子热激蛋白BsHsp17.3基因。序列分析表明，BsHsp17.3基因包含6个内含子和7个外显子，并编码了一段223个氨基酸的蛋白。此外，qPCR分析表明，在逆境条件下，该基因的表达模式具有明显的差异性，显示出逆境响应的特征。在高温和氧气缺乏下，其表达量显著上升，这表明BsHsp17.3基因在白及的热逆境和氧气缺乏逆境响应中发挥着重要的作用。相反，在干旱、低温和高浓度NaCl等条件下，BsHsp17.3的表达变化不够明显，这可能是因为白及已经有其他的抗逆机制。
结论
该研究克隆并表征了白及中的小分子热激蛋白BsHsp17.3基因，并通过逆境胁迫和qPCR分析发现其有明显的逆境响应特征。这些结果为进一步理解BsHsp17.3的功能及sHsp的分子机理提供了基础。