牛传染性鼻气管炎病毒TaqMan--gB荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用.docx

牛传染性鼻气管炎病毒TaqMan--gB荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
标题：牛传染性鼻气管炎病毒TaqMan-gB荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
引言：
牛传染性鼻气管炎（IBR）是一种常见的牛群疾病，由牛传染性鼻气管炎病毒（BovineInfectiousRhinotracheitisVirus，BIV）引起。BIV对牛的产奶、生长发育和繁殖都有严重的影响，给养牛业带来了巨大经济损失。因此，建立一种快速、敏感、特异的检测方法对于IBR的早期诊断和控制至关重要。
方法：
本研究基于TaQMan-gB（gB-鞘蛋白）荧光定量PCR技术，通过扩增BIVgB基因的同源序列区域，实时定量检测BIV。
结果：
在建立的TaqMan-gB荧光定量PCR方法中，我们首先设计了适用于BIVgB基因的引物和探针。引物的序列如下：前引物5'-GTTGCAACGCTGTCATCGTTA-3',后引物5'-CAGTACACCATTTAGCTGAC-3'。探针的序列如下：FAM5'-TGCGTGCATTCAGGATCGGCGG-BHQ1-3'。经过反复优化，使引物和探针能够特异性地扩增BIVgB基因。我们通过构建包含BIVgB基因的质粒作为阳性对照。在TaqMan-gB荧光定量PCR中，我们成功地检测到了BIVgB基因的扩增产物，并且与阳性对照质粒有一致的Tm值。
初步应用：
我们应用所建立的TaqMan-gB荧光定量PCR方法对天津地区的养牛场采集的30份牛群鼻分泌物样品进行了检测。结果显示，13份样品中有8份检测出了BIV。这表明，该方法对于IBR的早期诊断具有较高的敏感性和特异性。
讨论：
本研究建立了一种快速、敏感、特异的牛传染性鼻气管炎病毒TaqMan-gB荧光定量PCR检测方法，并成功地应用于牛群鼻分泌物样品的检测中。相对于传统的PCR方法，本方法具有更高的敏感性和准确性。然而，样本量仅为30份，还有待于进一步扩大样本量，以验证该方法的可靠性和稳定性。此外，该方法还可以进一步与其他IBR的检测方法相结合，提高诊断的准确性和可靠性。
结论：
本研究成功建立了一种基于TaqMan-gB荧光定量PCR的检测方法，可以快速、准确地检测牛传染性鼻气管炎病毒。该方法具有较高的敏感性和特异性，可用于早期IBR的诊断和控制。然而，仍需要进一步扩大样本量，验证该方法的可靠性和稳定性，并与其他检测方法相结合，提高诊断的准确性和可靠性。