发根农杆菌介导的植物基因转化ppt课件.ppt

发根农杆菌介导的植物基因转化发根是发根农杆菌
（Agrobacteriumrhizogenes)感染整体植株或其某一器官、组织、单个细胞甚至原生质体后，产生的一种形态上与植物气生根类似的根状器官.3什么是发根农杆菌?Ri质粒Ri质粒T－DNA区和Vir区的两个功能区.
T－DNA叫可转移DNA区,可插入到寄主植物基因组中，其中携带生根基因和冠瘿碱合成酶的基因.
Vir称致病区,不插入到寄主植物基因组DNA中，但与T－DNA的转移有关，Vir区缺失或突变则不能使感染的植物出现发根8发根农杆菌感染植物伤口后，受伤的植物细胞合成特殊的小分子化合物，诱导Ri质粒的Vir区基因群活化；
在Vir区基因表达产生的酶作用下T－DNA被切下；
T－DNA转移进细胞并整合到植物基因组DNA中；
T－DNA在细胞中转译，使宿主植物产生发根发状根的特点发根农杆菌感染植物的方法
含抗生素的培养基上继代培养除菌
选择生长速度较快、分枝较多的发根进行扩大培养
增殖培养常在低盐浓度的液体培养基中黑暗、恒温条件下进行悬浮、振荡培养，适当通入氧气利于根的生长.
一般为每月增殖数十倍，最高可达上千倍（如天仙子发根每月增殖2500～5000倍）发根的鉴定影响发根农杆菌转化的因素
目前超过100,000种化合物被从植物中鉴定，并以每年约4000种新化合物的速度增加.
植物次生代谢物质大多具有生物活性，被用作医药品、化妆品、食品添加剂等16植物次生代谢物的获得
对Ri质粒的敏感性：双子叶植物>单子叶植物，草本植物>木本植物
在感染转化的受体选择上，倾向于将叶片、子叶、子叶柄、胚轴作为外植体
将菌株、植物、外植体进行不同的组合，会导致发根诱导率的变化

水溶性酚：乙酰丁香酮、羟基乙酰丁香酮、儿茶酚、原儿茶酚、没食子酸、焦性没食子酸、二羟基苯甲酸、香草酚、对羟基苯酚等，可激活Vir区基因表达
光照

感染前高渗处理、
诱导培养时添加生长素等影响发根培养及次生代谢物合成的因素5.培养方法
固体培养
液体培养法进行成批培养或大规模发酵培养
两步培养法
两相培养法
反复成批培养
补料成批培养

6.生物反应器
发根易受剪切力伤害，且其生长迅速，密度高，供氧困难，保持低的流体压力和高的溶氧量十分必要
通气性能良好且剪切力较小的反应器是其理想反应器23发状根的用途丹参发根生物反应器大规模培养技术2627