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基质辅助激光解析电离飞行时间谱检测在临床致病真菌鉴定中的应用
概述
真菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，有少数真菌是人类或动物的致病原，能引起多种症状和疾病。临床上准确鉴定致病真菌种类对于治疗和预防感染具有重要意义。
传统的真菌鉴定方法主要是依靠形态学和生理学特征，但是这种方法的鉴定时间长、操作复杂、准确性受到环境因素的影响而受到了挑战。近年来，基质辅助激光解析电离飞行时间谱检测（MALDI-TOFMS）技术在真菌鉴定中的应用逐渐得到认可，并被广泛应用于临床样本的快速、准确鉴定。本篇论文将从MALDI-TOFMS技术的原理、技术优势及在临床致病真菌鉴定中的应用进行综述。
MALDI-TOFMS技术的原理
MALDI-TOFMS技术是一种基于质谱原理的生物分子分析技术，主要用于蛋白质和多肽的分析。此技术最早由Karas和Hillenkamp于1987年引入，是一种快速、精确、高灵敏度的蛋白质及多肽质谱分析技术。
MALDI-TOFMS技术的主要原理是利用位于基质上的蛋白质结晶吸收激光的能量，产生分子电离，生成大量电荷数相同的离子。离子在电场作用下被加速并聚焦到飞行时间管（TOF）内，不同大小的离子经过不同时间的飞行，到达检测器的时间也不同。通过记录样品分子离子的时间和幅度，就可以得到样品分子的质量。MALDI-TOFMS技术的主要优势在于快速、无需纯化样品、能够分析大分子，如蛋白质、核酸、糖类和脂类等，并且结果具有高度的重现性。
MALDI-TOFMS技术在临床致病真菌鉴定中的应用
MALDI-TOFMS技术已经被广泛应用于临床微生物学领域，尤其在临床致病真菌鉴定方面得到了广泛的应用和认可。传统的真菌鉴定方法主要是基于形态和生理学特征，如菌落形态、颜色、生长速度、菌丝生长形态，和生长条件等，但因为不同环境条件对菌落形态、生理学特性的影响，传统鉴定方法存在一定的局限性。
MALDI-TOFMS技术的应用能够快速、准确鉴定真菌的种类，且操作简单、费用低、减少了样本数量和菌种混杂的影响。其中，MALDI-TOFMS技术用于真菌鉴定主要分为直接和间接两种方式。
直接方法：将标本切片或刷子采集后，直接在MALDI-TOFMS下进行分析。由于真菌生物体积较小，其他细胞和蛋白质会影响质谱信号，因此需要样品预处理。样品的预处理方法主要包括孢子打碎、蛋白提取、洗涤等，这些处理能够有效去除杂质和细胞结构，提高质谱信号强度和准确性，同时减少了重复性和误解。
间接方法：其主要原理是通过PCR扩增的等方法取得真菌DNA并进行分析。该方法具有操作简便、重复性好、鉴定速度快等优点，同时能够在短时间内鉴定大量样品。
MALDI-TOFMS技术的应用能够快速、准确地鉴定致病真菌种类，从而能够掌握真菌的发生规律，对临床治疗和预防感染具有重要意义。
结论
MALDI-TOFMS技术的应用在临床致病真菌鉴定中具有明显的优势。因此，随着该技术的进一步发展和优化，将为临床真菌感染的治疗和预防提供更为准确、快速且可重复的生物分析方法。同时需要指出，该技术在样品预处理和特定真菌的鉴定方面还存在着一定局限性，需要加强基础研究和技术发展，完善技术的应用。