回收DNA片断及纯化质粒DNA方法的研究.docx
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回收DNA片断及纯化质粒DNA方法的研究.docx
回收DNA片断及纯化质粒DNA方法的研究回收DNA片断及纯化质粒DNA方法的研究摘要:DNA的回收与纯化在现代分子生物学研究中具有重要的意义。本文对DNA片断和质粒DNA的回收及纯化方法进行了研究,主要包括凝胶回收、聚集酶链式反应、环状DNA纯化、DNA吸附及离心纯化等方法。通过对比实验,对不同方法的特点、优缺点进行了深入分析。研究结果表明,综合使用多种方法能够最大程度地提高DNA的回收率和纯度,为后续的分子生物学研究提供了可靠的实验基础。引言:DNA的回收与纯化在分子生物学研究中起到了至关重要的作用。D
一种质粒DNA的产业化纯化方法及质粒DNA.pdf
本发明公开了一种质粒DNA的产业化纯化方法及质粒DNA,所述纯化方法包括以下步骤:在质粒DNA超滤浓缩液中加入辛酸钠,混匀后,常温放置一段时间,接着低温静置一定时间,然后澄清处理;然后依次进行离子交换层析、疏水层析、超滤除盐浓缩和过滤除菌,完成纯化。本发明在低温条件下,将辛酸钠应用于质粒DNA产品的纯化,不仅操作简便易放大,减少了操作步骤,同时提高了纯化质粒的总回收率,并符合药用标准;而且大大减少了硫酸铵的使用,降低了对操作人员和环境的影响。本发明纯化方法纯化效果好而且纯化过程大大减少了硫酸铵试剂的使用,
质粒DNA的分离`纯化.ppt
质粒是染色体外的DNA分子,大小可为1kb到200kb。大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子,以超螺旋形式存在。它是细菌内的共生型遗传因子。其复制和遗传独立于细菌染色体,但复制和转录依赖于宿主编码的蛋白和酶。质粒DNA-煮沸法质粒DNA-碱裂解法碱裂解法流程图菌种:E.coliMV1184(含pUC118)、E.coliK12(含pEGFP)设备:eppendorf管、微量取液器(20μl,200μl,1000μl),台式高速离心机,涡旋振荡器试剂:LB液体培养基、溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、RNA
碱裂解法提取质粒DNA和质粒DNA的纯化.docx
实验一、碱裂解法提取质粒DNA和质粒DNA的纯化一、实验目的学习并掌握基因工程操作技术中最常用的载体质粒DNA的提取方法和进一步的纯化技术。二、实验原理在碱性溶液中,双链DNA氢键断裂,DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性,但由于质粒DNA分子量相对较小,且呈环状超螺旋结构,即使在高碱性pH条件下,两条互补链也不会充分分离,当加入中和缓冲液时,变性质粒DNA又恢复到原来的够型;而线性的大分子量细菌染色体DNA则不能复性,与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶物,通过离心沉淀可被除去,而质粒DNA及小分子量的RN
质粒DNA提取纯化及验证.docx
【实验目的】1、掌握碱变性提取质粒DNA法的原理、过程及各种试剂的作用。2、掌握凝胶电泳对DNA分离纯化的原理和方法。【实验原理】1、提取、纯化质粒DNA(碱变性提取法)提取和纯化质粒DNA的方法很多,目前常用的有:碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB一氯化铯密度梯度离心法和Wizard法等。其中,碱变性提取法最为经典和常用,适于不同量质粒DNA的提取。该方法操作简单,易于操作,一般实验室均可进行。提取的质粒DNA纯度高,可直接用于酶切、序列测定及分析。碱变性提取质粒DNA一般包括三个基本步骤: