区分鸡新城疫病毒强弱株单抗的制备及双抗夹心ELISA方法的建立和应用.docx

区分鸡新城疫病毒强弱株单抗的制备及双抗夹心ELISA方法的建立和应用
区分鸡新城疫病毒强弱株单抗的制备及双抗夹心ELISA方法的建立和应用
摘要：
鸡新城疫病毒是一种高致病性禽病毒，对家禽养殖业造成了严重的经济损失。本研究旨在制备鸡新城疫病毒强弱株的单克隆抗体，并建立双抗夹心ELISA方法，用于鸡新城疫病毒的检测和区分强弱株。通过免疫小鼠制备鸡新城疫病毒单克隆抗体，经过筛选和鉴定得到高亲合力的单抗，利用这些单抗，建立了双抗夹心ELISA方法。该方法可以准确、快速地检测鸡新城疫病毒，并区分强弱株，具有潜在的应用价值。
引言：
鸡新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）是一种高度传染性的禽病毒，可以引起家禽严重的呼吸道疾病。鸡新城疫病毒可分为强弱株，强株致病力强，病毒复制速度快，易引起感染性鼻气管炎甚至死亡；而弱株致病力较弱，病程较长。因此，区分鸡新城疫病毒强弱株对于疾病的防控和流行病学调查具有重要意义。
方法：
1.鸡新城疫病毒强弱株单克隆抗体的制备
将强株鸡新城疫病毒和弱株鸡新城疫病毒分别接种于小鼠体内，注射多次，以刺激小鼠产生免疫应答。采集小鼠的脾脏细胞，与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。通过筛选和鉴定，得到对鸡新城疫病毒特异性较高的单克隆抗体。
2.双抗夹心ELISA方法的建立
选取特异性较高的单抗作为检测抗体，接着将这些单抗包被在酶标板上。将待测样品（包括强株和弱株病毒）加入包被好的酶标板孔中，经过洗涤去除非特异性结合。接着，加入第二个特异性抗体，该抗体可以与病毒特异性蛋白结合。再经过洗涤，加入底物，产生葡萄糖酸氧化物反应生成可见光。最后，利用酶标仪测定产生的可见光信号，判断阳性和阴性结果。
结果与讨论：
通过对比强株和弱株样品的ELISA结果，发现强株和弱株病毒可以被不同的单克隆抗体特异性地检测到。强株样品呈阳性反应，而弱株样品呈阴性反应。这表明我们建立的双抗夹心ELISA方法可以有效地区分鸡新城疫病毒的强弱株。
应用：
双抗夹心ELISA方法的建立，为鸡新城疫病毒的检测和区分强弱株提供了新的方法。该方法具有快速、准确、经济等优点，适用于鸡新城疫的监测和流行病学调查。我们相信该方法在鸡新城疫病毒的防控和研究中具有潜在的应用价值。
结论：
本研究成功制备了鸡新城疫病毒强弱株的单克隆抗体，并建立了双抗夹心ELISA方法，能够准确地检测和区分强弱株。该方法具有潜在的应用价值，在鸡新城疫病毒的防控和流行病学调查中具有重要意义。未来的研究可以进一步优化该方法，提高其敏感性和特异性，以满足实际应用的需要。