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共轭亚油酸合成相关基因在耶氏解脂酵母中异源表达及活性研究 共轭亚油酸(CLA)是一种具有重要健康功效的脂肪酸,其可以降低心血管疾病的发病率,增加体能和抗肿瘤等。因此,CLA已经成为了各国研究院所研究的重点之一。CLA是由奶油酸和油酸在肠道中通过一系列反应合成而成。这个反应涉及到多个基因的调控和参与。本文将对异源表达CLA合成相关基因在耶氏解脂酵母中以及其活性的研究进行探讨。 一、CLA合成相关基因的背景 CLA合成相关基因参与了CLA的合成反应,是CLA生物学特性的核心。CLA合成相关基因的研究可以为CLA相关领域的深入研究提供重要的基础参考。CLA合成相关基因包括stearoyl-CoAdesaturase(SCD)和Δ9-降酰基膜蛋白(ACBP)等。 SCD是CLA合成相关基因中的一个重要基因,是由FADS2基因编码的酶,能够催化油酸和奶油酸的双键合成,生成共轭亚油酸。因此,SCD的表达水平影响主要影响CLA生成的速率。而ACBP作为一个宿主蛋白质,与膜脂质交互作用的同时,也催化了传输和合成机制等过程中的代谢途径。 二、耶氏解脂酵母异源表达CLA合成相关基因 CLA通常由膳食中的动物脂肪、特别是乳制品中获取,但是最近研究表明,通过微生物生物转化法,可以通过菌类合成高品质的CLA。耶氏酵母是一种极低的营养来源下可以生长、无毒性和非致病性的酵母,在工业上有着广泛的应用。因此,耶氏酵母是CLA合成相关基因的异源表达载体之一。 目前,研究者通过克隆SCD和ACBP基因,以pYES-DEST52质粒为载体,构建了SCD和ACBP基因共表达载体。对表达的重组耶氏酵母Strain进行了较完整的酯化酶酶活性测定,研究结果表明,异源表达CLA合成相关基因在耶氏解脂酵母中具有较高的合成活性。这一研究结果表明,耶氏解脂酵母可以作为一种有效的CLA生物反应器,为CLA的生产提供了一个良好的载体。 三、耶氏解脂酵母CLA合成活性的分析 为了进一步阐明耶氏解脂酵母CLA合成活性的相关特征,研究者分析了不同CLAs的合成活性。根据实验结果,异源表达SCD和ACBP基因的耶氏解脂酵母可以合成不同种类的CLA,包括4种主要的CLA同分异构体:(-)-10,12-共轭亚油酸和(-)-9,11-和(-)-11,13-共轭亚油酸。 通过对异源CLA合成相关基因表达的耶氏解脂酵母将同分异构体生成率分析得到,异源CLA合成相关基因表达使用的是ACE1启动子,这一表达方式效果最佳。此外,耶氏解脂酵母一定量的诱导时间有助于CLA的产生,但过长的诱导时间会导致异源表达受到抑制,因此,在实际生产中需要对耶氏解脂酵母合成条件进行细致优化。 结论: 本文通过分析异源表达CLA合成相关基因在耶氏解脂酵母中的活性,发现耶氏解脂酵母可以用作一种有效的CLA生物反应器,对CLA领域的生产和研究具有重要意义。此外,在实际CLA生产中,需要对耶氏解脂酵母表达条件等因素进行优化,以提高其CLA生产效率,满足人们对于CLA的需求。