微生物学实验报告.docx

微生物学实验报告实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察第一部分：显微镜的使用一、目的要求1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。3．了解各种显微镜的主要特征。二、实验原理（一）光学显微镜的构造微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜它的构造可分为机械部分和光学部分。1、机械部分普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。（二）放大倍数标本首先经物镜放大在目镜的焦距平面上形成一个实像再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。物镜的放大倍数愈大其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短这时光圈就要打开得愈大。显微镜的放大倍数放大倍数总的放大倍数低倍镜高倍镜油镜物镜10×45×100×目镜10×10×10×100×450×1000×（三）分辨距离与分辨力显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离分辨距离愈小透镜的分辨力愈高物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。R=0.61λ/N.A式中：R-----分辨距离；λ------作用光的波长；N.A------数值口径。一些介质的折射率介质折射率空气水玻璃香柏油113551.56三、实验内容材料：显微镜香柏油擦镜纸。方法：细菌很小须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一观察时与玻片非常接近稍不小心即可压碎玻片更严重的是损坏镜头故必须极其仔细地学习油镜的使用方法：1、为使低倍镜取得最适之光源可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度将聚光器提高光圈完全打开然后调节电压旋钮至视野最合适。滴一滴香柏油固定于载物台上用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下下旋粗调节器使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察（如光线不足可适当增大电源电压）徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像则再重新操作。更换标本时应先提高油镜头再更换玻片切勿随意移动显微镜的位置。油镜观察完毕后按“显微镜保护”中（6）项处理。最后将油镜各部分还原聚光器下降反光镜垂直于镜座镜头转成八字形以免与聚光器发生碰撞。四、思考题1、使用显微镜时为何调节下列构造？反光镜光圈聚光器粗调节器细调节器镜头回转器。答：聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度上升则视野明亮下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。2、使用不同放大倍数的物镜时工作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜？答：物镜的放大倍数愈大其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短。标本首先经物镜放大在目镜的焦距平面上形成一个实像再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质？油镜的原理是什么？答：香柏油只在使用油镜头时（100倍物镜）使用因为当镜与装片之间的介质为空气时由于空气（n=1.52）的折射率不同光线会发生折射不仅使进入物镜的光线减少降低了视野的照明度而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时由于它的折射率与玻璃相近光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射不仅增加了视野的照明度更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的油镜时能辨别两点之间的距离则为0.22μm。选用香柏油是因为它的折射率是1.5154、显微镜有哪几种？各自的主要特征是什么？答：光学显微镜中除明视野显微镜外还有暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜；除光学显微镜外还有电子显微镜。暗视野显微镜：在普通光学显微镜载物台下安装一个暗视野聚光器即成暗视野显微镜。相差显微镜：相差显微镜成像的原理和普通光学显微镜一样所不同的是相差显微镜包括有环状光阑、装有相板的相差物镜和全轴调整望远镜三个特殊部分。荧光显微镜：荧光显微镜的主要特征是以紫外线为光源当照射到用荧光素标记的细菌时荧光素吸收了紫外线的能量后再发射出可见的橙、黄、浅绿色荧光。由于用荧光素标记的菌体各种结构中的溶解、吸附或化合情况不一于是发出不同色调和亮度的荧光从而可以观察细菌的不同结构。电子显微镜：电子显微镜的基本结构和工作原理与普通光学显微镜非常相似不同的是用电子流代替光线用电磁圈代替透镜聚焦。第二部分：细菌形态学检查方法一、目的