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轮状病毒灭活疫苗纯化、灭活及抗原定量检测方法的建立 摘要 本文旨在建立轮状病毒灭活疫苗的纯化、灭活及抗原定量检测方法。首先采用梯度离心法对疫苗进行纯化,然后采用低温和化学处理对轮状病毒进行灭活处理,并通过传染性试验进行灭活效果验证。最后,利用酶联免疫吸附法对疫苗中轮状病毒的抗原含量进行定量检测。通过本研究,成功建立了轮状病毒灭活疫苗的纯化、灭活及抗原定量检测方法,为今后的相关研究提供了参考作用。 关键词:轮状病毒;灭活疫苗;纯化;灭活;抗原定量检测 引言 轮状病毒是一种引起小儿腹泻的病原体,其传播速度快、感染广泛,且易于引起疫情爆发。因此,发展有效的预防措施对于防控轮状病毒疫情至关重要。目前,轮状病毒灭活疫苗是有效预防轮状病毒感染的手段之一。然而,疫苗的制备过程中存在成本高、疫苗含量不确定等问题,因此,建立轮状病毒灭活疫苗的纯化、灭活及抗原定量检测方法,具有重要意义。 方法 1.疫苗的纯化 采用梯度离心法对轮状病毒灭活疫苗进行纯化。首先,将疫苗加入离心管中,并混匀均匀。然后,放置在离心机中进行离心分离。将分离后的不同密度层进行收集,得到不同含量的轮状病毒。 2.疫苗的灭活 采用低温和化学处理对轮状病毒进行灭活处理。首先,将轮状病毒疫苗置于-70℃低温下,放置一段时间以使其失去活性。然后,加入化学灭活剂进行灭活处理。处理后,通过传染性试验验证轮状病毒已失去传染性。 3.疫苗的抗原定量检测 利用酶联免疫吸附法对疫苗中轮状病毒的抗原含量进行定量检测。首先,将轮状病毒疫苗加入特定的试剂液中进行固定。然后,加入抗体底物以发生化学反应。最后,通过检测产生的荧光信号来定量检测疫苗中轮状病毒的抗原含量。 结果与讨论 通过本研究建立了轮状病毒灭活疫苗的纯化、灭活及抗原定量检测方法。通过梯度离心法可以有效的将疫苗纯化,得到含量不同的轮状病毒。通过低温和化学处理对轮状病毒进行灭活处理,通过传染性试验验证轮状病毒已失去传染性。通过酶联免疫吸附法对疫苗中轮状病毒的抗原含量进行定量检测,可以准确的检测到疫苗中轮状病毒的抗原含量,并为今后疫苗的制备和疫苗质量控制提供了实用的检测方法。 结论 本研究成功建立了轮状病毒灭活疫苗的纯化、灭活及抗原定量检测方法。该方法可以为今后相关研究提供参考作用,并对疫苗的制备和质量控制具有重要意义。 参考文献 1.CunliffeNA,BoothJA,ElliotC,etal.Healthcare-associatedviralgastroenteritisamongchildreninalargepediatrichospital,UnitedKingdom[J].EmergInfectDis,2010,16(1):55-62. 2.WorldHealthOrganization.Rotavirusvaccines:WHOpositionpaper-January2013[J].WklyEpidemiolRec,2013,88(5):49-64. 3.JiangB,GentschJR.Rotavirusvaccines:currentstatusandfutureprospects[M].Springer,2012.