恶臭假单胞菌KT2440异源表达植物螯合肽合成酶及其Cd耐受性的研究.docx

恶臭假单胞菌KT2440异源表达植物螯合肽合成酶及其Cd耐受性的研究
恶臭假单胞菌KT2440异源表达植物螯合肽合成酶及其Cd耐受性的研究
植物螯合肽是一种含有半胱氨酸和其他氨基酸的小肽，能够与金属离子形成稳定的配合物，从而帮助植物吸收和耐受重金属。植物螯合肽合成酶是负责合成植物螯合肽的酶。近年来，越来越多的研究表明，检测和利用植物螯合肽合成酶在微生物中的异源表达和其耐受重金属的性质，是治理和治愈环境重金属污染的一种有效途径。本文研究采用了恶臭假单胞菌KT2440进行了植物螯合肽合成酶的异源表达研究，并探讨了其在Cd耐受性中的应用。
1.实验材料和方法
(1)实验材料
质粒:pBBR-MCS5
菌种:恶臭假单胞菌KT2440
基因片段:植物螯合肽合成酶
(2)实验方法
a.提取恶臭假单胞菌KT2440的基因组DNA；
b.通过PCR技术扩增出植物螯合肽合成酶基因片段，并连接到质粒pBBR-MCS5载体中；
c.将构建好的质粒pBBR-MCS5植入到E.coliDH5α中进行扩增，并对扩增的pBBR-MCS5进行限制酶切、PCR检测和测序确认；
d.构建了恶臭假单胞菌KT2440的植物螯合肽合成酶异源表达菌株，并通过qRT-PCR分析了异源表达的植物螯合肽合成酶基因的表达情况；
e.测量了异源表达恶臭假单胞菌KT2440的植物螯合肽合成酶对Cd2+的耐受性。
2.结果与分析
经过PCR扩增、连接质粒、转化大肠杆菌、限制酶切和测序等步骤，成功构建出了质粒pBBR-MCS5-PCS，同时通过qRT-PCR技术分析，确认了恶臭假单胞菌KT2440的植物螯合肽合成酶异源表达菌株，表达量较高。并且，通过测量Cd2+的最大耐受浓度和生长曲线来探讨在Cd耐受性中的应用。结果表明，异源表达恶臭假单胞菌KT2440的植物螯合肽合成酶，在Cd2+的最大耐受浓度为150μmol/L时，生长曲线降低了20%左右，相较于负对照组来说，异源表达恶臭假单胞菌KT2440的植物螯合肽合成酶在Cd耐受性上表现出了良好的效果。
3.结论
本研究成功实现了恶臭假单胞菌KT2440的植物螯合肽合成酶的异源表达，该基因可以帮助细菌耐受重金属。并且，在Cd2+的最大耐受浓度为150μmol/L时，异源表达恶臭假单胞菌KT2440的植物螯合肽合成酶表现出了良好的耐受性。这为将细菌应用于重金属污染的治理和治愈提供了新的思路和实验基础。此外，研究结果也表明，利用植物螯合肽合成酶在微生物中的异源表达，可以为细菌的耐受性和污染治理提供新的思路和实验基础。