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弓形虫组织蛋白酶B缺失株构建及部分生物学特性研究
弓形虫（Toxoplasmagondii）是一种寄生虫，一般感染脊椎动物和人类。其组织蛋白酶B（CysteineproteaseB，CPB）是一种重要的酶，参与了寄生虫内各种生物过程。本研究以弓形虫组织蛋白酶B基因为目标，利用CRISPR/Cas9技术成功构建了CPB缺失株，并分析了其部分生物学特性。
实验方法
1.CRISPR/Cas9基因编辑技术
引物设计并制备，利用pCR-BluntII-TOPO克隆载体克隆（CPB-KO-P1），将其质粒进行限制酶切并纯化，转化至弓形虫原虫体内并筛选，最后通过PCR和西方印迹法验证目标基因缺失的有效性。
2.杀灭弓形虫感染小鼠的实验
药物（sulfadiazine和pyrimethamine）被用于杀灭感染CPB缺失株弓形虫的小鼠，观察其其死亡时间和感染部位的变化。
3.测量弓形虫生长指数
使用MTT分析法、螺旋体计数法和光学显微镜法，分别测量CPB缺失株和野生型弓形虫的生长指数，比较两者的增殖速度。
结果分析
1.CRISPR/Cas9技术成功构建CPB缺失株
通过PCR和WesternBlot分析，证明CPB基因被成功编辑，并且CPB缺失株弓形虫中CPB蛋白没有表达。
2.弓形虫感染小鼠的存活时间
与野生型弓形虫感染小鼠相比，CPB缺失株弓形虫感染小鼠的存活时间延长。
3.CPB缺失株弓形虫的生长指数
MTT法、螺旋体计数法和光学显微镜法均表明，与野生型弓形虫相比，CPB缺失株弓形虫的生长速度较慢。
讨论
对于弓形虫来说，CPB基因是一种重要的酶，参与了生物过程中的多种功能。因此，本研究使用CRISPR/Cas9技术成功构建了CPB缺失株并分析了其部分生物学特性，结果表明CPB缺失株弓形虫感染小鼠的存活时间延长，生长速度也较慢。这些结果也表明CPB基因可能是一种潜在的靶点，可用于治疗弓形虫感染。此外，本研究结果还可为加深我们对弓形虫CPB基因的认识提供帮助，为未来对弓形虫的治疗和防治提供理论支持。