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实时荧光环介导等温扩增技术检测牛奶中蜡样芽孢杆菌的研究
随着现代化生产和加工技术的不断更新换代，工业化的农产品处理方式也逐渐趋于成熟，对于消费者来说选择优质的食品更显得重要。其中，在保障食品安全和营养价值方面被消费者广泛关注的一个指标就是微生物污染。因此，对于食品中常见的病原微生物检测技术不断更新升级，为保障食品的安全性提供帮助。本文就要着重介绍一种针对蜡样芽孢杆菌的检测方法——实时荧光环介导等温扩增技术。
一、蜡样芽孢杆菌的基本概述
蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）是一种常见的耐热性芽孢菌，铺产于自然界中的土壤、气泡和水体中，同时也存在于各种食品中，如米饭、馒头、肉类、奶制品、果汁等。因为其有两种表型的特点，一种是产生外毒素的肌溶解型，另一种则是产生内毒素的腹泻型，因此B.cereus不仅会引起食物中毒，还可能引发呼吸和皮肤过敏反应。
值得注意的是，蜡样芽孢杆菌的检测是相当有难度的。首先，由于细菌内含有芽孢，使得细菌与一般的菌种不同，常见的市场上的检测试剂盒对于它的检测存在误差。其次，蜡样芽孢杆菌的快速增殖和高度适应性，使其的生长条件不受限制，对于环境变化反应十分敏感，这给其检测带来很大的困难。
二、实时荧光环介导等温扩增技术的原理
实时荧光环介导等温扩增技术是利用引物特异性结合靶标DNA序列，在等温条件下进行DNA扩增，初步实现了说明DNA特异性的可视化检测。简单来说，就是在反应体系中加入核酸引物、聚合酶、荧光素和环介质等，通过引物与靶标DNA结合后形成双链DNA聚合酶引导下的循环放大反应，并且在反应过程中荧光素被荧光探针捕捉。当荧光素受到激发光的照射后，勘探荧光信号的强度、区域程度、荧光系数的变化状态等，可以确定是否存在靶标DNA序列，从而进行病原体检测。
三、实时荧光环介导等温扩增技术的应用于蜡样芽孢杆菌检测
在牛奶及乳制品中，蜡样芽孢杆菌的检测更为重要和困难，因为其快速生长的特点，需要更为灵活的技术手段，这就需要借助于实时荧光环介导等温扩增技术。此技术可以适应性较强，并且在近年来的应用中表现不俗。检测过程大概分为以下几个步骤：
1.从研究样品中提取DNA，通过DNA电泳对DNA进行验证;
2.加入不同浓度的蜡样芽孢杆菌模拟物到以荧光素I为信号环介质的等温扩增反应终端中，进行扩增反应。
3.监测反应增长曲线。如下图所示，可以看到在荧光相对强度结束反应的的质量增长曲线下对于不同质量数增加的荧光响应（a、b、c和d）具有不同的时间延迟和强度反应。其中，在等温扩增反应中荧光信号在反应的后期阶段达到一个明显的平台，表明等温扩增反应已经进入了稳定相，并且将生物材料的浓度控制在一定范围之内。
4.根据增长曲线和荧光信号，可以明确描绘出不同质量数下相对荧光强度和放大倍数之间的关系，从而确定样本中蜡样芽孢杆菌的浓度，并且将结果进行对比分析。
四、结论
通过本文对实时荧光环介导等温扩增技术检测蜡样芽孢杆菌的研究，可以看到这项技术具有灵敏度高，选择性好，反应时间短，样本检测成本低等诸多优点。从而进一步提高食品安全检测的准确性、速度和经济性，为社会的健康提供了更为重要的保障。