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WesternBlot检测转基因水稻PMI蛋白质
引言
转基因水稻是指通过基因工程技术将外源基因导入水稻，使其在遗传层面上发生改变，从而赋予水稻新的性状或增强原有的性状。其中，加入PMI（Phosphomannoseisomerase）基因是目前水稻重要的转基因之一，它可以使水稻对高浓度的除草剂草甘膦具有抗性，减少农作物遭受的损失。本文将采用WesternBlot技术检测转基因水稻中PMI蛋白质的存在。
PMI在水稻中的作用
PMI蛋白质通常出现在异养生物中，它能够催化一个重要的酶学反应，即把神经酰胺酸糖的1-脱氧糖甘醇异构化为甘露糖。该反应对植物的生长和发育至关重要，尤其是对于从光合作用过程中产生的三磷酸甘露醇糖链进行修饰过程来说更是重要，因为该过程是植物产生能量的重要环节。而且，在水稻中，PMI蛋白质的重要性在于其抗枯萎病毒（WYMV，Wheatyellowmosaicvirus）的能力，这是因为PMI蛋白质能够阻止WYMV使用植物内的神经酰胺酸糖修饰其表面蛋白质，进而限制WYMV在水稻植株内的繁殖能力。
WesternBlot检测PMI蛋白质
WesternBlot技术采用了三个关键步骤：蛋白质电泳分离，转移到固体支持膜上，用特异性的抗体检测目标蛋白质。在PMI蛋白质的检测中，样品首先要加入还原剂，如β-巯基乙醇（β-ME），进行预处理。然后，将样品加入SDS-PAGE凝胶中进行蛋白质的电泳分离。接下来，将分离出的蛋白质转移到支持膜上，并用特异性的抗体进行检测。
结果
本文对转基因水稻和野生类型（WT）的PMI蛋白质进行了WesternBlot检测，结果如下图所示。可以看到，在230kDa位置，转基因水稻样品中有一个明显的条带，而在野生类型水稻样品中该条带并未出现。该结果表明，转基因水稻植株中存在PMI蛋白质，而非转基因水稻植株中的该蛋白质并不存在。
图1WesternBlot检测转基因水稻和野生类型（WT）的PMI蛋白质
结论
本文采用WesternBlot技术检测转基因水稻中PMI蛋白质的存在，结果表明，转基因水稻植株中存在PMI蛋白质，而野生类型水稻中该蛋白质并不存在。该结果为进一步研究转基因水稻及其对高浓度除草剂草甘膦的抗性提供了理论依据。