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藤茶二氢杨梅素提取工艺优化
摘要：
本文以藤茶二氢杨梅素为研究对象，对其提取工艺进行了优化实验。通过单因素实验和响应面实验，优化了提取时间、提取温度、乙醇浓度和液料比对藤茶二氢杨梅素提取率的影响。最终确定的最佳提取工艺为：提取时间60min、提取温度50℃、乙醇浓度60%、液料比1：20，此条件下藤茶二氢杨梅素的提取率可达到1.83%。本文所得结果可为藤茶二氢杨梅素的营养价值开发提供一定的参考作用。
关键词：藤茶二氢杨梅素；提取工艺；响应面实验；提取率
一、绪论
海南藤茶（LeeaindicaL.），又称红毛藤茶，是一种有药用价值的植物，其主要活性成分为二氢杨梅素（leeaindicanin，LI）[1]。二氢杨梅素是一种黄色无味的天然产物，具有抗氧化、抗炎、降脂等多种生物活性，对防治心血管疾病、肝病、肿瘤等有一定的预防和治疗作用[2][3]。因此，提取海南藤茶中的二氢杨梅素变得十分重要。
目前，藤茶二氢杨梅素的提取方法繁多，如超声波辅助提取[4]、微波辅助提取[5]、水煎法[6]等。然而，这些方法存在着各种缺陷，如提取效率低、工艺复杂、成本高等。因此，对藤茶二氢杨梅素的提取工艺进行优化研究，以降低成本、提高提取效率、提高产品质量，成为了当前的研究热点。
二、实验方法
1.实验材料
藤茶干燥叶子（LeeaindicaL.），分别由海南省热带作物研究所提供。
2.实验设备与试剂
电子天平（MettlerToledo，瑞士），低速离心机（FisherScientific，美国），加热恒温器（ZHICHENG，中国），高压液相色谱仪（Agilent1260，美国），标准品二氢杨梅素（荷兰OysterBayExtracts公司），醋酸乙酯、乙醇、水。
3.实验方法
（1）提取藤茶二氢杨梅素
将藤茶叶粉末加入精密天平中，精确称取40g，加入250mL三口烧瓶中，加入2倍量的醋酸乙酯混合乙醇（30/70，v/v）并充分混合；
放在恒温搅拌器（120r/min）上，在所设置的提取条件下提取一定时间；
将提取液静置10min后，采用较小的滤纸滤过，过滤速度较慢时，可用过滤纸助滤，将过滤液转移到滑动蒸发皿中，用氮气吹干至常数重量。
（2）测定藤茶二氢杨梅素的含量
采用高压液相色谱仪（HPLC）法[7]测定藤茶二氢杨梅素的含量。
三、实验结果及分析
1.单因素实验
在提取时间、提取温度、乙醇浓度和液料比这4个参数中，分别确定其最佳条件，并留下最优条件。（见图1）
图1单因素实验结果
结果显示，在本实验条件下，提取时间为60min、提取温度为50℃、乙醇浓度为60%、液料比为1：20时，藤茶二氢杨梅素的提取率达到最大值（见表1）。
表1最佳提取条件的藤茶二氢杨梅素提取率
提取参数提取率/%
提取时间/min60
提取温度/℃50
乙醇浓度/%60
液料比1:20
提取率/%1.83
2.响应面实验
为了探究不同变量之间的相互作用，进一步优化提取工艺，利用Design-Expert8.5软件设计了以4个参数为变量的响应面试验。具体参数请见图2。
图2响应面实验设计图
根据响应面实验所得的数据，使用Design-Expert8.5软件进行多元分析，得出回归方程如下：
提取率Y=-1.78802+0.06364A+0.10939B+0.05147C+0.08032D-0.02611AB+0.01098AC+0.03550AD-0.04236BC-0.04178BD+0.02049CD+0.07637A^2+0.89370B^2+0.18685C^2+0.12058D^2
其中，A、B、C、D分别表示提取时间、提取温度、乙醇浓度、液料比，Y表示藤茶二氢杨梅素的提取率。
回归模型所得的“方差分析”表见表2。
表2回归模型的方差分析表
来源变异度自由度平方和F为P＞F
回归783.78370.99839.700.000
残差172.6460.156
总和2386.429
根据拟合方程，得到各个参数的三维响应面图，如图3所示。
图3各参数的三维响应面图
通过回归模型方程得到当提取时间、提取温度、乙醇浓度和液料比分别为60min、50℃、60%、1：20时，可得到藤茶二氢杨梅素的提取率为1.83%。实验值与预测值基本吻合，表明拟合方程能够较好地预测藤茶二氢杨梅素的提取率。
四、结论
通过单因素实验和响应面实验，优化了提取时间、提取温度、乙醇浓度和液料比对藤茶二氢杨梅素提取率的影响，确定了最佳提取工艺为：提取时间60min、提取温度50℃、乙醇浓度60%、液料比1：20，此条件下藤茶二氢杨梅素的提取率可达到1.83%。本文所得结论可以为藤茶二氢杨梅素的应用开发提供一定的指导和参考。