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山东省猪圆环病毒2型的分离鉴定及其ORF2基因遗传进化分析
山东省猪圆环病毒2型的分离鉴定及其ORF2基因遗传进化分析
摘要：
本研究对山东省猪圆环病毒2型的分离鉴定及其ORF2基因遗传进化进行了分析。通过在山东省某生猪养殖场采集血液与组织样品，经过分离、纯化、PCR检测和测序分析，鉴定出圆环病毒2型的分离株。对圆环病毒2型分离株ORF2基因进行了遗传进化分析，结果显示，该圆环病毒2型分离株基因序列具有较高的同源性，与国内外报道的圆环病毒2型基因序列相似度为87.5%-98%。进化树分析显示，该分离株与我国南方地区分离株形成一个分支，与欧洲分离株形成另一个分支。本研究为进一步研究圆环病毒2型的分子流行病学和疫苗防控提供了依据，同时也为山东省圆环病毒2型的防控和流行病学研究提供了新的数据。
关键词：圆环病毒2型；分离鉴定；ORF2基因；遗传进化分析
1.引言
圆环病毒是一种常见的病毒，可以感染猪、家禽、牛、羊等多种动物，引起疾病。其中，猪圆环病毒是猪场中的主要病原体之一，其引起的疾病主要表现为腹泻、呕吐、发热等症状，严重时还会导致猪的死亡。目前，圆环病毒已经被广泛地分为18个血清型，其中第2型圆环病毒是较为常见的型别之一。
在猪的圆环病毒感染过程中，ORF2基因是一个关键基因，它编码了圆环病毒的主要结构蛋白VP1，具有决定病毒血清型和免疫原性的作用。因此，对猪圆环病毒2型分离株ORF2基因的遗传进化分析，可以为圆环病毒的分子流行病学和防控提供重要的参考依据。
本研究旨在对山东省猪圆环病毒2型进行分离鉴定，并对其ORF2基因进行遗传进化分析，为圆环病毒的防控和流行病学研究提供新的数据。
2.材料与方法
2.1样品采集
在山东省某生猪养殖场，采集15份疑似圆环病毒感染的猪血液样品，并从3只死亡猪体内收集脾脏、肝脏、肺等组织样品。采样过程中，严格遵守消毒、隔离等措施，以避免病毒传播和样品交叉污染。
2.2圆环病毒分离和纯化
将采集到的脾脏、肝脏、肺等组织样品分别切成5mm×5mm的小块，加入盛有PBS缓冲液的显微管中，并进行离心收集。得到的细胞沉降物通过0.22μm的过滤器进行过滤，得到滤液。将滤液加入老鼠胚胎细胞中进行培养，根据细胞的形态变化、病毒的复制等特征，判定分离的圆环病毒2型。
2.3PCR检测和测序
通过构建圆环病毒2型的PCR检测引物，在分离得到的圆环病毒2型中进行PCR检测。PCR产物通过凝胶电泳检测，确定是否为目标片段。将PCR产物进行提取、纯化、克隆等处理后送测序进行分析。
2.4遗传进化分析
将获得的ORF2基因序列与国内外报道的圆环病毒2型基因序列进行比对，计算序列同源性和相似度。利用MEGA6.0软件，进行物种遗传树的构建和遗传进化分析。
3.结果
3.1圆环病毒2型的分离鉴定
通过对采集到的猪血液和组织样品进行分离纯化，成功分离出了6个圆环病毒2型分离株。经过PCR检测和测序分析，结果证实分离株为圆环病毒2型。
3.2ORF2基因序列遗传进化分析
将6个圆环病毒2型分离株的ORF2基因序列与国内外报道的圆环病毒2型基因序列进行比对，结果显示，6个分离株的ORF2基因序列具有较高的同源性，相似度在87.5%-98%之间。进化树分析显示，6个分离株形成一个分支，与我国南方地区分离株形成相邻分支，与欧洲分离株形成另一个分支。
4.讨论
本研究通过对山东省某生猪养殖场的猪血液与组织样品进行分离检测，成功分离出6个圆环病毒2型分离株，并对其ORF2基因进行遗传进化分析。结果显示，6个分离株的基因序列具有较高的同源性，与国内外报道的圆环病毒2型基因序列相似度较高，表明山东省的圆环病毒2型依然与全球其他地区的同一血清型病毒保持相似性。
进化树分析显示，本研究分离株形成一个分支，与我国南方地区分离株形成相邻分支，与欧洲分离株形成另一个分支。这表明，圆环病毒2型在地理分布上存在一定的差异化，需要根据不同地区的疫情情况制定更加个性化的防控措施。
总之，本研究为山东省圆环病毒2型的防控和流行病学研究提供了新的数据，同时也为圆环病毒的分子流行病学和疫苗防控提供了依据。