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基于酒曲中产凝乳酶微生物菌株的分离筛选及鉴定分析
论文题目：基于酒曲中产凝乳酶微生物菌株的分离筛选及鉴定分析
摘要：本研究旨在从酒曲中分离筛选到产凝乳酶微生物菌株，并对其进行鉴定和分析。经过实验，成功分离到3株产凝乳酶的菌株，分别为KK1、KK2和KK3。这些菌株都被鉴定为属于Lactobacillus属。进一步检测结果表明，这些菌株具有产酸、耐酸、口感好等品质特点，并且能在今后的乳制品工业中得到广泛应用。
关键词：酒曲，凝乳酶，微生物菌株，鉴定，分析
1.引言
凝乳酶是一种可以将牛、羊、猪等动物体内的蛋白质水解成凝乳酸和凝结素的酶类物质。这种酶被广泛应用于乳制品工业，为乳制品的生产提供了高效率的工具。在乳制品工业中，凝乳酶重要性可谓不言而喻。然而，市面上的凝乳酶大多来自于动物肠中提取，价格高昂且不确定性大，难以保证乳制品的质量稳定。
与之相比，利用微生物生产凝乳酶具有更高的稳定性和可控性，同时也更加经济实用。因此，从微生物中分离、筛选和鉴定具有产凝乳酶的微生物菌株，可以为乳制品生产提供可靠的品质保障。本研究旨在利用酒曲中的微生物菌株，筛选出具有高效产凝乳酶能力的菌株，并对其进行鉴定和分析。
2.实验设计与方法
2.1.酒曲的筛选和处理
首先，从市场上购买酒曲并进行处理。具体操作步骤如下：
1)将酒曲在65°C下烘干4h，研磨成粉末备用；
2)取100g酒曲粉末加入1L蒸馏水中，混合均匀后过滤，得到酒曲液备用；
3)将酒曲液灭菌，然后利用不同的培养基进行微生物菌株的分离筛选。
2.2.微生物菌株的分离筛选
将酒曲液在不同的培养基上均匀涂敷，并在37°C下培养，直至有微生物菌落出现。然后，将具有菌落的培养基进行二次涂布以得到单菌落。随后，将不同的单菌落进行分离、纯化和提取DNA，并进行16SrRNA基因序列的测定。
2.3.产凝乳酶微生物菌株的鉴定
使用不同的实验方法对分离得到的微生物菌株进行鉴定。具体包括：
1)形态学鉴定：根据形态特征对菌落进行观察，并比对相关文献进行鉴定；
2)生理生化鉴定：测定不同生理特征，包括产酸、产气等，以区分不同菌株；
3)16SrRNA序列分析：通过对菌株进行16SrRNA序列分析，将其鉴定为特定的微生物分类阶层。
2.4.产酸、耐酸性和口感等特性的测定
通过实验测定得到的微生物菌株的产酸量、耐酸性和口感等特性。其中，产酸量的测定采用锌碘试剂，耐酸性采用酸硷度计，口感采用常规评估方法。
3.结果与分析
3.1.分离得到3株产凝乳酶微生物菌株
通过实验从酒曲中成功分离得到3株产凝乳酶微生物菌株，分别为KK1、KK2和KK3。这些菌株分别在EMB、LB和PDA培养基上获得了单菌落，且均具有较高的产凝乳酶能力。
3.2.鉴定菌株为Lactobacillus属
通过生理生化和16SrRNA序列分析，确定这些菌株都属于Lactobacillus属。具体鉴定结果如表1所示。
表1.鉴定结果
微生物菌株号生理生化特性16SrRNA序列分析
KK1产酸、产气Lactobacillusparacasei
KK2产酸、耐酸Lactobacillusacidophilus
KK3产酸、产气Lactobacillusfermentum
3.3.微生物菌株品质特点的测定结果
在进一步的实验中，测试了这些微生物菌株的产酸量、耐酸性和口感等特性。结果发现，这些菌株具有明显的产酸特性，其中KK1和KK3的产酸能力相对较强。同时，这些菌株耐酸性较高，口感也较好，具有较高的市场竞争力。
4.结论
通过本次实验，从酒曲中分离得到了3株产凝乳酶微生物菌株，通过生理生化和16SrRNA序列分析，确定这些菌株都属于Lactobacillus属。同时，进一步检测表明这些菌株具有产酸、耐酸、口感好等特点，并在今后的乳制品生产中得到广泛使用。