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不同树龄茶树根际土壤细菌多样性的T-RFLP分析
摘要：
茶树是我国重要的经济作物，其根际土壤微生物对植株生长和品质有着重要的影响。本研究利用T-RFLP技术对不同树龄茶树根际土壤中的细菌多样性进行了分析。结果表明，茶树根际土壤中的细菌群落结构随着树龄的增长而变化，不同树龄茶树根际土壤中具有独特的群落结构。此外，不同基因座所得到的结果也存在差异。本研究结果对于茶树优质生产和生态系统保护具有一定的参考价值。
关键词：T-RFLP；茶树；根际土壤细菌群落；树龄
1.介绍
茶树是我国传统的经济作物之一，被广泛种植于南方地区。茶树根际土壤中的微生物是土壤生态系统的重要组成部分，对植物的生长和品质有着重要的影响。因此，对于茶树根际土壤中的微生物群落结构的研究具有重要的理论意义和应用价值。目前，越来越多的研究利用分子生物学技术对根际土壤微生物进行研究，其中T-RFLP技术是一种常被使用的方法。
T-RFLP技术是利用PCR扩增特定基因的DNA片段，再通过酶切和聚丙烯酰胺凝胶电泳得到DNA片段的信息，从而分析微生物群落的结构和多样性。T-RFLP具有高通量、高灵敏度、高重复性等优点，被广泛应用于微生物群落分析领域。
2.材料和方法
2.1样品采集
本研究采集了不同树龄的茶树，分别为1年生、3年生、5年生和7年生。每个年龄组选取5个样品进行研究。从每个样品中随机采集20个茶树根系，将根系表面的土壤剖出，并混合均匀后得到根际土壤样品。将样品放入2ml离心管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，利用振荡器振荡2分钟，离心下沉沉淀。
2.2DNA提取
DNA提取采用DNA快速提取试剂盒(Roche)进行。提取的DNA通过质量检测以及泳道电泳进行质量和完整性检测。
2.3PCR扩增和酶切
扩增前将DNA样品浓度调整至10ng/ul。扩增反应总体积为50ul，包含10mmol/lTris-HCl(pH8.0)，1.5mmol/lMgCl2，50mmol/lKCl，0.2mmol/ldNTPs，0.3umol/l双末端引物以及0.15unit/lTaqpolymerase。PCR扩增反应条件为：95℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸45s，共34个循环。PCR最终延伸为10min。
生成的PCR产物进行酶切，选用MspI酶切，将得到的产物纯化并使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。
2.4T-RFLP分析
生成的T-RFLP数据可以使用多种方法进行数据处理和分析。在本研究中，使用BIO-LV软件对产生的塑料酶切型(T-RFs)进行聚类分析和PCA(主成分分析)。
3.结果
3.1样品分析
从不同树龄的茶树中获取的根际土样品总共有20个，这些样品在提取DNA之后得到了高质量的DNA。在经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析后，得到了符合预期的PCR产物。
3.2细菌群落分析
在T-RFLP图谱中，可以发现在不同树龄的茶树中存在着不同数量的T-RFs和独特的T-RFs。聚类分析表明，不同树龄的茶树中存在着独特的细菌群落结构。PCA图表明，在不同的树龄组中存在着不同的细菌群落结构。
4.讨论
本研究利用T-RFLP技术对不同树龄的茶树根际土壤中的细菌多样性进行了分析。结果表明，茶树根际土壤中的细菌群落结构随着树龄的增长而变化，不同树龄茶树根际土壤中具有独特的群落结构。此外，不同基因座所得到的结果也存在差异。本研究结果对于茶树优质生产和生态系统保护具有一定的参考价值。
5.结论
利用T-RFLP技术分析了不同树龄茶树根际土壤中的细菌多样性。结果表明，不同树龄茶树根际土壤中存在着独特的细菌群落结构。对于茶树优质生产和生态系统保护具有一定的参考价值。
参考文献：
1.何方.不同海拔茶园土壤真菌多样性的T-RFLP分析[J].河南农业科学,2012(11):63-67.
2.王斌,刘晓平.T-RFLP技术在土壤微生物群落研究中的应用[J].土壤通报,2005(36):782-784.
3.赵琬琰,范瑞阳.基于T-RFLP技术分析水稻根际土壤和根系微生物多样性西华师范大学学报(自然科学版),2020,41(6):682-687.