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齐墩果酸对血管紧张素Ⅱ诱导乳小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制
引言
心肌成纤维细胞是心肌组织中最主要的非心肌细胞，其重要功能是维持心脏的正常结构和功能。当心脏发生损伤或疾病时，心肌成纤维细胞会被激活并增殖，导致心肌纤维化和重构，进而导致心脏病变和功能障碍。因此，阻止或减少心肌成纤维细胞增殖是心脏病治疗的一个重要目标。
血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是一种具有强大生物活性的肽类激素，在心血管系统中具有重要的生理和病理作用。多项研究表明，AngⅡ可以通过多种机制促进心肌成纤维细胞增殖，因此阻断AngⅡ信号通路可以减少心肌纤维化和重构，有助于治疗心脏病。
齐墩果酸（OA）是一种天然产物，广泛存在于植物和动物组织中。OA具有多种生物活性，包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤等。最近的研究表明，OA可以通过多种机制抑制心肌成纤维细胞增殖，并减轻心脏病的病理改变。然而，关于OA抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖的机制还不清楚。因此，本研究旨在探讨OA对AngⅡ诱导乳小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响以及其机制。
方法
实验动物和药物
本研究使用乳小鼠心肌成纤维细胞系CFB进行细胞培养。OA和AngⅡ均购买自Sigma公司。
细胞培养和处理
CFB细胞在培养皿中以DMEM培养基为基础进行培养，并加入10%FBS和适量的青霉素/链霉素抗生素。细胞培养密度为1×10^4/cm^2。细胞在37℃、5%CO2、95%湿度下培养。
首先，我们分别将CFB细胞分为四组：对照组、AngⅡ诱导组、OA预处理组和OA+AngⅡ组。对照组细胞不接受任何处理，AngⅡ诱导组细胞接受100nM的AngⅡ刺激，OA预处理组细胞先接受10μMOA预处理30min,然后接受100nM的AngⅡ刺激，OA+AngⅡ组细胞先接受10μMOA预处理30min后，再接受100nM的AngⅡ刺激。随后，取出细胞样本进行MTT测定和qPCR分析。
MTT测定
MTT法用于检测CFB细胞增殖情况。将各组细胞种植在96孔板中，每组4个孔。每组细胞被处理后培养48小时，加入5mg/mLMTT溶液，继续培养4小时。然后，将MTT溶液去除，加入150μLDMSO，并轻微震动溶解晶体。通过比色计测定OD值。
qPCR分析
通过qPCR分析，检测各组CFB细胞中相关基因的表达量。取出各组CFB细胞样本，使用TRIzol方法提取总RNA，根据反转录实际模板的程序，将其转录为cDNA。随后使用SYBRGreenI进行实时荧光PCR，根据基因的Ct值计算相对表达量。本研究检测的基因包括：基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）和转化生长因子β1（TGF-β1）。
结果
MTT测定显示，与对照组相比，AngⅡ诱导组的CFB细胞活性明显增强；预处理OA的CFB细胞活性略低于AngⅡ诱导组，说明OA对AngⅡ诱导升高的CFB细胞增殖产生了抑制作用；而预处理后的OA+AngⅡ组的CFB细胞活性显著低于AngⅡ组，表明OA可以抑制AngⅡ诱导的CFB细胞增殖（P<0.05）。
qPCR结果显示，MMP-2、TIMP-1和TGF-β1的表达量在AngⅡ诱导组显著增加（P<0.05），而预处理OA的CFB细胞中，这些基因的表达量均明显下降。预处理OA+AngⅡ组的CFB细胞中，这些基因的表达量与AngⅡ诱导组相比显著降低（P<0.05）。
讨论
本研究发现，OA可以抑制AngⅡ诱导的CFB细胞增殖，并抑制了MMP-2、TIMP-1和TGF-β1mRNA的表达。这表明OA具有抗心肌纤维化的潜力，并且可能通过调节这些基因的表达来发挥其抗纤维化作用。
MMP-2是心肌成纤维细胞增殖和代谢的重要调节因子。TIMP-1是一个调节MMP-2活性的天然抑制剂。高水平的TIMP-1表达可导致MMP-2活性下降，从而阻碍ECM的降解，导致纤维化进程明显加剧。TGF-β1是一个细胞因子，可以促进组织修复和纤维化。AngⅡ可以诱导TGF-β1表达，从而促进纤维化。本研究显示，OA显著抑制了AngⅡ诱导的MMP-2、TIMP-1和TGF-β1mRNA的表达，说明OA具有抑制心肌纤维化的潜力。
总结
在本研究中，我们探讨了OA对AngⅡ诱导乳小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响。我们的结果表明，OA可以通过抑制MMP-2、TIMP-1和TGF-β1mRNA的表达来抑制AngⅡ诱导的CFB细胞增殖。这些结果提供了OA作为防止心肌纤维化的潜在治疗药物的证据。