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苦荞总黄酮的提取及体外抗肿瘤活性研究
摘要：
苦荞是一种食品和药用植物，具有广泛的保健功能。其中一种活性成分——苦荞总黄酮，被认为具有抗肿瘤活性。本研究旨在提取苦荞总黄酮并评估其体外抗肿瘤活性。采用乙醇浸提、液液分离、硅胶柱层析和凝胶过滤等技术从苦荞中提取得到苦荞总黄酮。通过MTT细胞增殖实验和AnnexinV-PE/7-AAD双染色流式细胞术，评估了苦荞总黄酮对人肺腺癌A549细胞的抑制和凋亡诱导作用。结果表明，苦荞总黄酮可以明显抑制A549细胞的增殖，同时诱导其凋亡。此外，这种抗肿瘤活性与苦荞总黄酮的浓度成正相关。这些结果表明，苦荞总黄酮具有潜在的抗肿瘤活性，可能成为一种新的治疗肺腺癌的药物。
关键词：苦荞、总黄酮、提取、肺腺癌、抑制、凋亡诱导
一、引言
肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，也是导致死亡率居高不下的恶性肿瘤之一。许多治疗方法都有一定的副作用和限制，因此，开发新的抗肿瘤治疗药物成为了一项重要的任务。苦荞是一种食品和药用植物，具有广泛的保健功能。近年来，已经有很多研究表明，苦荞中的苦荞总黄酮具有多种生物活性，例如，抗氧化、抗炎、降血糖、改善脂质代谢、降血压等，这些作用有助于预防多种疾病。
二、实验材料和方法
2.1实验材料
苦荞种子、纯化水、醋酸乙酯、乙醇、硅胶60、MTT、凋亡检测试剂盒、AnnexinV-PE/7-AAD双染色流式细胞术。
2.2提取苦荞总黄酮的方法
2.2.1苦荞种子的制备
将苦荞种子按照适当比例混合，在常温下保存。蒸发前用慢火烘干2h。
2.2.2乙醇浸提
取制备好的苦荞种子，以30mL/g的比例加入纯化水和96%乙醇混合液中，置于水浴中加热1h，冷却后过滤，收集过滤液，再进行重复提取；每次提取液合并并水浴浓缩至一定浓度。
2.2.3液液分离
将提取的乙醇浸提液与醋酸乙酯在一定比例下分离，分离出乙醇相后冷冻破碎户两相分离。
2.2.4硅胶柱层析
将乙醇相样品加入硅胶柱中，使用四氯化碳和甲醇的混合液进行洗脱，再将洗脱后的柱中液浓缩得到苦荞总黄酮粗品。
2.2.5凝胶过滤
将苦荞总黄酮粗品用10kDa的超滤膜进行超滤除杂。
2.3体外细胞实验
2.3.1细胞系
人肺腺癌A549细胞株。
2.3.2MTT细胞增殖实验
将A549细胞悬于细胞培养液中，以不同浓度的苦荞总黄酮处理24h，然后吸除培养液，加入MTT溶液，孵育4h后以DMSO溶解，使用多功能酶标仪检测。
2.3.3AnnexinV-PE/7-AAD双染色流式细胞术
将A549细胞悬于细胞培养液中，以不同浓度的苦荞总黄酮处理24h，按照说明书双染色后检测细胞死亡率。
三、结果和讨论
3.1提取苦荞总黄酮
通过乙醇浸提、液液分离、硅胶柱层析和凝胶过滤等技术，从苦荞中提取得到苦荞总黄酮。通过对苦荞总黄酮样品的红外光谱和紫外光谱分析，证明提取的物质为苦荞总黄酮。
3.2体外细胞实验
采用MTT实验评估了不同浓度苦荞总黄酮对A549细胞增殖的影响，结果表明，随着苦荞总黄酮浓度的增加，A549细胞增殖受到越来越大的抑制，其IC50值为18.6μM；通过AnnexinV-PE/7-AAD双染色流式细胞术检查A549细胞的凋亡情况，发现苦荞总黄酮可以明显诱导A549细胞凋亡。
三、结论
本研究提取得到苦荞总黄酮，并证明其对人肺腺癌A549细胞的增殖具有抑制作用，同时能够诱导其凋亡。这些结果表明，苦荞总黄酮具有潜在的抗肿瘤活性，可能成为一种新的治疗肺腺癌的药物。未来需要进一步深入的临床研究才能发掘出更多的治疗可能性。