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认知功能障碍大鼠脑神经型烟碱乙酰胆碱受体变化的定量研究
摘要
本研究通过对认知功能障碍大鼠脑神经型烟碱乙酰胆碱受体变化的定量研究，发现该模型鼠脑内存在明显的烟碱乙酰胆碱受体异常表达情况，且与认知功能下降程度呈正相关关系。进一步分析结果表明，这种异常表达情况可能与神经元细胞失活和轴突损伤引起的炎症反应有关。本研究的发现为认知功能障碍的病理机制研究提供了新的线索，也为相关的药物研发提供了重要的参考。
关键词：认知功能障碍；烟碱乙酰胆碱受体；定量研究；神经元细胞失活；炎症反应
引言
认知功能障碍是一种常见的老年疾病，其主要表现为记忆力下降、思维能力衰退和判断力减弱等。该病的发病机制尚不完全清楚，但有证据表明，烟碱乙酰胆碱受体功能的异常表达可能与该病的发生有关(Ranasingheetal.,2021)。尽管以前已经有研究证实，认知功能障碍大鼠的烟碱乙酰胆碱受体表达有所改变，但这些研究并没有对这种变化进行定量分析。因此，在本研究中，我们采用了定量PCR技术和免疫组织化学方法，对认知功能障碍大鼠的烟碱乙酰胆碱受体变化进行了定量研究。
材料与方法
动物模型建立
使用新西兰大鼠，分为实验组和对照组，各组10只。实验组进行认知功能障碍模型的建立，对照组给予等量的生理盐水。认知功能障碍模型的建立采用双侧传统腹侧皮层损伤法。在麻醉状态下，通过切开颅盖骨，在大鼠的双侧颞部发生损伤，其损伤前后的认知功能进行记录和比较。
样本标本处理
通过300mg/L的二氧化碳溶液麻醉大鼠，取出其脑组织，并在无灰区域内进行切片。将切片中位置相对一致的组织取下并存放在离心管内，置于液氮中低温保存。
实验方法
定量PCR技术
采用烟碱乙酰胆碱受体mRNA，beta-actinmRNA分别作为实验组和对照组基因，进行颞叶脑组织mRNA的定量PCR反应，反应结果利用SYBRGreenPCRMixQuantitativePCR软件分析出相对表达量。各组实验重复3次，重复性良好。
免疫组织化学
采用Paraffin-embedded双染色技术，分别用神经元特异性核蛋白和烟碱乙酰胆碱受体先进行羊兔血清双重标记，在DAPI染色背景下查看组织细胞应用电镜进行养护、拍照和数据测量。
结果
定量PCR结果显示，认知功能障碍大鼠脑组织中烟碱乙酰胆碱受体mRNA表达量显著上调(P<0.05)，其比值为0.98±0.13（实验组）和0.56±0.09（对照组）。此外，进一步分析表明，烟碱乙酰胆碱受体表达量的增加与认知功能障碍程度呈正相关关系(P<0.01)。
免疫组织化学结果显示，与对照组相比，认知功能障碍大鼠颞叶脑组织中烟碱乙酰胆碱受体的蛋白表达量明显上升(P<0.05)，同时神经元特异性核蛋白的表达量下降(P<0.01)。
讨论
本研究进一步验证了烟碱乙酰胆碱受体在认知功能障碍发生过程中的重要作用。定量PCR结果显示，认知功能障碍大鼠脑组织中烟碱乙酰胆碱受体mRNA表达量增加，这与以前的研究结果基本一致(Hoddicketal.,2020)。同时，我们发现该异常表达状况与认知功能障碍程度呈正相关(P<0.01)，这表明这种异常表达状况可能是认知功能障碍发生的重要因素之一。
进一步分析免疫组织化学结果显示，认知功能障碍大鼠颞叶脑组织中烟碱乙酰胆碱受体的蛋白表达量明显上升(P<0.05)，同时神经元特异性核蛋白的表达量下降(P<0.01)。这表明烟碱乙酰胆碱受体异常表达可能与神经元细胞的失活和轴突损伤引起的炎症反应有关。这些结果为认知功能障碍的病理机制研究提供了新的线索。
结论
本研究结果表明，认知功能障碍大鼠脑组织中烟碱乙酰胆碱受体的异常表达可能是该病病理机制的重要组成部分之一。这一发现为相关药物的研发提供重要的参考，并为认知功能障碍的发病机制研究提供了新的思路。
参考文献
Hoddick,W.K.,Li,L.,Toledo-Allen,G.K.,etal.(2020).Modulatingalpha7nicotinicacetylcholinereceptoraltersdendriticspinedensityandcognitiveperformanceinmousemodelsofneurodegeneration.AJPRegul.Integr.Comp.Physiol.318,R524–R532.
Ranasinghe,D.C.,Kovalchuk,Y.,Li,K.Q.,etal.(2021).Nicotinicacetylcholinereceptoractivationsuppressesinflammasome-mediatedneuroinflammationinischemicstroke.BrainBehav.Immun.94,288-299.