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9.1概述 9.2干细胞体外培养技术 9.3干细胞治疗及临床应用9.4干细胞工程展望利用干细胞工程技术有可能实现: 完美地修复或替代人体组织、肢体或器官的伤残 根治恶性肿瘤、帕金森病、中风等疾病1896年,E.B.Wilson首次使用干细胞名词 1961年Till和McCulloch首先描述了造血干细胞 的特征 1967年,美国华盛顿大学的多纳尔·托马斯开拓了 干细胞临床应用的研究 1981年,英国剑桥大学的Evans和Kaufman建立 了胚胎干细胞系1998年11月,美国威斯康星大学的Thomson和 Shamblott成功地使人类胚胎干细胞在体外生 长和增殖 1999年3月,美国科学家Goodell发现小鼠肌肉 组织干细胞可以横向分化为成血细胞。 2001年11月25日,美国马萨诸塞州先进细胞技 术公司培育出人体早期胚胎 2002年2月,麻省理工学院科学家首次用人体ES细胞培育出毛细血管 随后的3~5年期间,各国的科学家们进一步致力于诱导胚胎干细胞分化、成体干细胞的“横向分化”方面的课题 目前,科学家已经试图将一些正常的体细胞直接转化为诱导多能性干细胞(iPCs),它们具有类似胚胎干细胞(ES)的功能。 2007.11.20日本京都大学Yamanaka和美国威斯康辛大学JamesThomson,宣布成功把人体皮肤细胞改造成类似胚胎干细胞的“万能细胞”。9.1.2干细胞工程的重要性及意义2003年《自然》《科学》分别将老鼠的胚胎干细胞中产生出精、卵细胞列为十大科学进展第4和第7位。 2007年《自然》和《科学》将将体细胞“返老还童”变成胚胎干细胞的研究结果,分别列为当年十大重要发现之一 《时代杂志》甚至将上述实验结果列为2007年重大发现之首! 意义 重建或修复组织器官的种子细胞 已有临床实验证明,干细胞是重建或修复病损或衰老组织器官功能的理想种子细胞,对白血病、癌症、严重免疫性疾病以及心血管疾病、糖尿病、早老性痴呆症和脊髓受损患者有惊人的治愈作用。 认识基本生命规律干细胞研究将促进科学家重新认识细胞生长、分化、生物发育机制等基本生命规律; 尤其是胚胎干细胞的识别、分离、增殖、定向分化将成为细胞生物学以及整个生命科学的主攻热点。干细胞的特点按发生学来源分类形态:细胞体积较小,通常呈圆形或椭圆形,核质比例较大。细胞核染色质分布较弥散,核仁较明显。细胞质内除含有游离核糖体外,其它细胞器均少且小。根据形态学特性和存在的位置可以辨认不同的干细胞。生化特征:不同种类的干细胞生化特征有所差异,都有较高的端粒酶活性,具有较强的增值能力。不同干细胞具有各异的生化标志。实验证明,干细胞生存的微环境可以影响其形态和生化特征。干细胞通过两种有丝分裂方式进行繁殖:有丝分裂周期有 丝 分 裂对称分裂→两个相同的(干/分化)细胞 非对称分裂→一个干细胞 一个祖细胞→分化细胞→成熟细胞 细胞系(细胞株)通过细胞分离和纯化过程,使 得培养物成为单一型培养物,甚至是遗 传特性完全一致的培养物,称为细胞系。细胞分离纯化常用方法有: 1、利用细胞体积和密度,这是基于沉降作用原理,通过离心等方法,将沉降速度不同的细胞分开。 2、选择性的细胞凝集,加入某种絮凝剂或物理处理的方法,使某种细胞凝集,加速沉降出去。 3、基于不同粘附特性,某些细胞的基本生物学特性之一是粘附于某些固体物质,根据细胞粘附能力强弱来分离。 4、利用细胞表面标志,这是一种抗体介导的细胞分离技术,选择某种单克隆抗体特异性亲和吸附分离。渗透压:多数细胞有一定的耐受渗透压能力,可在培养基配制时加以控制。1、基本方法一个成年人含有2.5×1013个红细胞每一个红细胞平均寿命为120天(107秒)相当于机体每秒需产生2.5×106个红细胞这些成熟的血细胞是如何产生?所有血细胞均来自于一个共同的始祖细胞——造血干细胞(HSC)即:造血干细胞→造血祖细胞→前体细胞→成熟血细胞 (1)在体内终身生存,数量和质量保持不变,移植后可永久重建造血; (2)兼有向髓系和淋巴系多向分化的潜能,即重建造血的同时重建免疫。一个造血干细胞→分裂为两个子细胞表1造血干细胞移植适应症造血干细胞提取(外周)(自体)干细胞移植法AD包括:溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣等。 利用干细胞移植法: 使用大剂量化疗联合自体HSC治疗顽固高危AD 临床上已有AD患者痊愈的实例1、何谓胚胎干细胞(ES)胚胎干细胞(ES)(2)ES的来源胚泡存活5~7天的胚胎由大约140个细胞所组成,看上去像黏稠的浆果或花粉粒。它们通体毛绒绒,相互依偎着呈空心的圆球状。滋养层胚泡的外层组织即滋养层,由一层扁平的细胞组成,会发育成胎盘。囊胚腔胚泡中心的腔内细胞团腔内一侧的细胞群,它是由受精卵分裂得到的约16~33个细胞组成。胚胎干细胞由内