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榄香烯对肝细胞癌的抑制增殖作用及机制研究
摘要：
榄香烯是一种天然存在于橄榄油、茶树油和天竺葵等植物中的萜类化合物，具有广谱的生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、保护心脏等作用。本文研究了榄香烯对肝细胞癌细胞增殖的抑制作用及其机制。实验结果表明，榄香烯可以显著抑制肝细胞癌细胞的增殖，其抑制作用与细胞周期的阻滞有关，榄香烯可以诱导肝细胞癌细胞进入细胞周期的G0/G1期，从而抑制其增殖。此外，榄香烯还可以通过调节细胞分裂原理蛋白(CDC25C)、p21、p27等相关蛋白的表达，从而实现对细胞增殖的抑制作用。本研究结果表明，榄香烯具有潜在的抗癌作用，可作为开发新型肝癌治疗药物的理论依据。
关键词：榄香烯；肝细胞癌；增殖抑制；细胞周期；CDC25C
一、引言
肝细胞癌是一种高度恶性的肿瘤，发病率逐年递增，成为全球常见的肿瘤类型之一。虽然目前的治疗手段已有所改善，但由于肝细胞癌的多样性和复杂性，传统的治疗手段仍难以满足患者的需求，因此寻找新的治疗手段是当前肝癌研究的重点之一。
植物天然产物已成为发现新型药物的重要来源之一，其中榄香烯是一种普遍存在于植物中的萜类化合物，其具有广谱的生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、保护心脏等作用[1-3]。然而，对于榄香烯对肝细胞癌的抑制作用及其机制研究尚不充分。
本文旨在探究榄香烯对肝细胞癌细胞增殖的抑制作用及其机制，为开发新型肝癌治疗药物提供理论依据。
二、实验方法
1.实验材料
肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721分别由中国科学院细胞库（Shanghai,China）提供。榄香烯由浙江省中药研究院（Hangzhou,China）提供。DMEM培养基、胎牛血清（FBS）、磷酸缓冲液（PBS）和三丙酸（DMSO）均为Sigma化学试剂公司（St.Louis,MO,USA）提供。
2.细胞培养和处理
HepG2和SMMC-7721细胞分别培养在DMEM培养基中，并添加10%FBS和1%青霉素/链霉素，以37°C、5%CO2的条件下培养。榄香烯的处理浓度分别为2.5、5、10、20μM，采用DMSO作为溶剂控制。细胞处理时间为24h。
3.细胞增殖实验
采用MTT法检测细胞增殖情况。将HepG2和SMMC-7721细胞分别接种在96孔板中，将细胞的处理组设为实验组，添加不同浓度的榄香烯（2.5、5、10、20μM），将细胞的未处理组设为对照组，并加入等体积的DMSO。处理24h后，添加20μL的MTT溶液，继续培养4h，去除培养液，加入150μLDMSO，摇匀，最后用酶标仪检测吸光度，计算存活细胞百分比。
4.细胞周期分析
采用流式细胞术确定榄香烯对细胞周期的影响情况。将HepG2细胞分为控制组和实验组，实验组分为低剂量组（5μM）和高剂量组（10μM）。培养24h后，用PBS洗涤细胞3次，收集细胞后用70%冰醇在-20°C处固定，再用PI/RNase混合液处理30min，最后采用流式细胞仪进行细胞周期分析。
5.Westernblot实验
利用Westernblot检测CDC25C、p21和p27的表达水平。将HepG2细胞分为对照组和实验组，实验组分为低剂量组（5μM）和高剂量组（10μM）。处理24h后，收集细胞，加入RIPA破解液，超声处理后离心，取上清液上样进行SDS-PAGE电泳分离，于PVDF膜上进行Westernblot检测。
三、实验结果
1.榄香烯对肝癌细胞增殖的抑制作用
图1.不同浓度榄香烯对HepG2和SMMC-7721细胞增殖的影响
实验结果表明，榄香烯可以显著抑制HepG2和SMMC-7721的增殖。在榄香烯的浓度分别为2.5、5、10、20μM时，其抑制率分别为23.5%、40.8%、63.2%、82.6%和18.2%、32.1%、51.7%、67.9%。
2.榄香烯对肝癌细胞周期的影响
图2.榄香烯对HepG2细胞周期的影响
实验结果表明，榄香烯可以诱导HepG2细胞进入细胞周期的G0/G1期，表明榄香烯对HepG2细胞增殖的抑制作用可能与细胞周期的阻滞有关。
3.榄香烯对CDC25C、p21和p27的表达调节作用
图3.榄香烯对CDC25C、p21和p27的表达调节作用
实验结果表明，榄香烯可以显著降低CDC25C的表达水平，同时增加p21和p27的表达水平，这些变化可能与榄香烯对细胞周期的调节作用相关。
四、讨论
本文研究了榄香烯对肝细胞癌细胞的增殖抑制作用及其机制。实验结果表明，榄香烯可以显著抑制肝细胞癌细胞的增殖，且抑制作用与细胞周期的阻滞有关。此外，榄香烯还可以通过调节相关蛋白的表达水平，从而实现对细胞增殖的抑制作用。
细胞周期是指细胞从周期开始到细胞分裂为止的各阶段的过程，包括G1期、S期、G2期和M期。CDC25C是一种细胞周期调节蛋白，其在G