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毛果杨PtrWRKY73转录因子在转基因拟南芥中的抗病及抗旱研究
引言
近年来，随着全球气候变化带来的干旱和疫病的加剧，对于提高植物的抗旱和抗病能力的研究成为了热点。研究表明，转录因子在植物的生长和发育以及环境适应中具有重要的作用。毛果杨（Populustomentosa）是重要的经济林木，具有重要的生态和经济价值。在这篇文章中，我们将探讨毛果杨PtrWRKY73转录因子在转基因拟南芥中的抗病和抗旱作用。
材料和方法
1.克隆毛果杨PtrWRKY73基因
从毛果杨转录组中克隆PtrWRKY73基因。基因放在pDONR221载体中，然后通过LR反应插入到pCAMBIA2300载体。在得到构建的载体后，通过测序验证PtrWRKY73的核酸序列是否正确。
2.转基因拟南芥
将构建的pCAMBIA2300-PtrWRKY73载体用电子轰击法转化到拟南芥中，转化后通过抗性筛选找到包含pCAMBIA2300-PtrWRKY73与荧光标记载体pGreenII35S的转化子。确认转基因拟南芥中的PtrWRKY73基因是否被成功表达。
3.鉴定转基因拟南芥
PCR分析，鉴定转基因拟南芥中是否存在PtrWRKY73基因。定量实时PCR测定转基因拟南芥中PtrWRKY73mRNA表达水平。
4.抗旱实验
在不含水的条件下遗传培养转基因拟南芥和野生型拟南芥，同时盆栽水分含量不低于15%，培养2周后。记录处理组和对照组的各项生长指标，如生长状态、根长、叶面积、鲜重和干重等。
5.抗病实验
将转基因拟南芥和野生型拟南芥暴露在金黄色葡萄球菌（Pseudomonassyringaepv.tomatoDC3000）中，测量病原体在转基因拟南芥和野生型拟南芥的繁殖和生长情况。通过相互比较病原体的生长情况，评估PtrWRKY73表达对转基因拟南芥在抵抗病原体入侵方面的影响。
结果与分析
1.鉴定转基因拟南芥
经PCR检测，转基因拟南芥中检测到了PtrWRKY73基因的存在。定量实时PCR结果显示，转基因拟南芥中PtrWRKY73mRNA的表达水平显著高于野生型拟南芥。
2.抗旱和抗病实验
在没有水的情况下，转基因拟南芥的生长、根长、叶面积、鲜重和干重比野生型拟南芥更优。此外，在抵抗金黄色葡萄球菌侵染方面，转基因拟南芥表现出更强的抵抗力。由此可以推断出PtrWRKY73在拟南芥中的表达可以增强植物的抗旱和抗病能力。
讨论
我们运用转录组测序技术，克隆毛果杨PtrWRKY73转录因子并评估了其在拟南芥中的获得的作用。结果表明，PtrWRKY73通过增强拟南芥的抗病和抗旱能力，具有广泛的应用前景。然而，该结果仅从拟南芥的实验结果得出。尽管拟南芥是经典研究模型植物，但它和毛果杨的遗传和生理代谢差异很大。因此，还需要进一步研究确定毛果杨PtrWRKY73在毛果杨中的功能。
结论
在上述研究中，我们探索了毛果杨PtrWRKY73转录因子在拟南芥中的抗病和抗旱功能。结果表明，PtrWRKY73扮演重要的功能，可以增强拟南芥的抗病和抗旱能力。该研究为进一步研究毛果杨抗病和抗旱机制提供了借鉴，同时，也为开发抗性物种、提高农作物产量提供了思路。