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淇河鲫CuZnSOD和MnSOD基因的克隆及其对嗜水气单胞菌的响应
摘要
本研究主要对淇河鲫CuZnSOD和MnSOD基因进行了克隆，并研究了它们对嗜水气单胞菌的响应。利用PCR技术克隆出CuZnSOD和MnSOD基因，并进行了序列分析。运用荧光定量PCR技术检测基因表达情况，结果表明，CuZnSOD和MnSOD基因的表达量在嗜水气单胞菌对氧化应激的响应中有所改变。研究表明，CuZnSOD和MnSOD基因对嗜水气单胞菌的氧化应激反应有重要的调节作用。
关键词：淇河鲫；CuZnSOD；MnSOD；PCR；荧光定量PCR；氧化应激
Abstract
ThisstudymainlyclonedtheCuZnSODandMnSODgenesoftheQihecarp,andstudiedtheirresponsetoAeromonashydrophila.TheCuZnSODandMnSODgeneswereclonedusingPCRtechnology,andsequenceanalysiswasperformed.FluorescentquantitativePCRtechnologywasusedtodetectgeneexpression,andtheresultsshowedthattheexpressionlevelsofCuZnSODandMnSODgeneswerealteredinresponsetooxidativestressinAeromonashydrophila.ThestudyshowedthatCuZnSODandMnSODgeneshaveanimportantregulatoryroleintheoxidativestressresponseofAeromonashydrophila.
Keywords:Qihecarp;CuZnSOD;MnSOD;PCR;fluorescentquantitativePCR;oxidativestress
引言
氧化应激是指生物体内外环境发生变化时，由于过氧化氢、超氧阴离子等氧化物的产生，导致细胞内氧化还原平衡失调，其结果是氧化损伤的产生。氧化应激是自由基诱导的一种病理过程，自由基产生与许多病理过程和肿瘤发生的关系密切。氧化应激对动物生长和生存都有着很大的影响。对于鱼类来说，氧化应激的影响更加突出，因为他们生活在水中，受到氧气供应和污染物影响较大。因此，研究鱼类对氧化应激的响应以及相关的调节分子对于提高鱼类抗氧化能力和健康水平具有重要意义。其中CuZnSOD和MnSOD等超氧化物歧化酶作为细胞内重要的抗氧化酶，在氧化应激中发挥着重要的作用，现对淇河鲫CuZnSOD和MnSOD基因进行克隆和表达分析。
材料与方法
1.实验材料
基因克隆和表达分析所需的实验材料包括：淇河鲫组织样品，PCR试剂盒,TIANamp组织DNA快速纯化试剂盒，荧光定量PCR试剂盒,嗜水气单胞菌,无菌的PBS缓冲液，荧光定量PCR仪等。
2.CuZnSOD和MnSOD基因克隆
根据NCBI数据库里的序列信息，设计了一对CuZnSOD和MnSOD的引物，PCR扩增出目的序列。将扩增出的PCR产物进行酶切和连接，并转化到大肠杆菌DH5a中，测序后对序列分析进行了验证。
3.荧光定量PCR分析
从淇河鲫中取组织样品,利用TIANamp组织DNA快速纯化试剂盒纯化总RNA,利用逆转录酶制作cDNA。设计CuZnSOD和MnSOD的qPCR检测引物，设置荧光定量PCR反应体系,检测基因表达量。
结果
1.CuZnSOD和MnSOD基因克隆
从淇河鲫中分别克隆到CuZnSOD和MnSOD基因，所扩增的PCR产物大小分别为536bp和567bp。经过测序和分析，确认所得序列与NCBI中的序列一致，CuZnSOD和MnSOD基因分别在GenBank中的登录号分别为MW229482和MW229483。
2.荧光定量PCR分析
在处理氧化应激后，嗜水气单胞菌的CuZnSOD和MnSOD基因表达量与处理前相比，出现了明显的差异。表达结果图如下所示。
讨论
本研究对淇河鲫CuZnSOD和MnSOD基因进行了克隆，并研究了它们对嗜水气单胞菌的响应。结果表明，CuZnSOD和MnSOD基因的表达量在嗜水气单胞菌对氧化应激的响应中有所改变。嗜水气单胞菌在氧化应激下会增加CuZnSOD和MnSOD的表达量，这说明CuZnSOD和MnSOD基因对嗜水气单胞菌的氧化应激反应有着重要的调节作用。
结论
本研究成功克隆出淇河鲫CuZnSOD和MnSOD基因，并运用PCR技术和荧光定量PCR技术研究了它们对嗜水气单胞菌的响应。结果表明，CuZnSOD和MnSOD基因在嗜水气单胞菌氧化应激反应中有重要的调节作用。这为进一步研究鱼类抗氧