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家蚕BmFKBP45基因的表达及功能分析
摘要：
家蚕BmFKBP45基因是家蚕固有的一种别嘌呤酸结合蛋白，早期的研究表明它在生长和发育过程中发挥重要作用。本文通过RT-PCR和Westernblot分析，研究了BmFKBP45基因在家蚕不同组织中的表达情况及其对高盐胁迫和低温胁迫的响应。实验结果显示，BmFKBP45基因在家蚕不同组织中均有表达，且在肠道和脂肪体中表达量较高；在高盐胁迫和低温胁迫下，BmFKBP45基因的表达量均有升高，表明其在逆境应对中发挥着一定的作用。通过RNAi技术敲低BmFKBP45基因表达，进一步证明BmFKBP45基因在家蚕幼虫生长和发育中具有重要作用。
关键词：家蚕；BmFKBP45基因；表达；逆境应对；RNAi
Abstract:
TheBmFKBP45geneinthesilkwormisanintrinsictypeofimmunophilin,whichisknowntoplayanimportantroleingrowthanddevelopment.Inthisstudy,weanalyzedtheexpressionoftheBmFKBP45geneindifferenttissuesofthesilkwormanditsresponsetohighsaltandlowtemperaturestressbyRT-PCRandWesternblot.TheresultsshowedthattheBmFKBP45genewasexpressedinalltissuesofthesilkworm,withhigherexpressionlevelsintheintestineandfatbody.Underhighsaltandlowtemperaturestress,theexpressionlevelofBmFKBP45genewasup-regulated,suggestingitsroleinstressresponse.UsingRNAitechnologytoknockdowntheexpressionofBmFKBP45genefurtherconfirmeditsimportanceinthegrowthanddevelopmentofsilkwormlarvae.
Keywords:Silkworm;BmFKBP45gene;expression;stressresponse;RNAi
Introduction：
家蚕（Bombyxmori）是一种重要的高档纺织品经济昆虫，被广泛用于丝绸和纤维的生产。作为一种模式昆虫，家蚕也被广泛用于功能基因组学和生物学研究。
别嘌呤酸结合蛋白（FKBPs）属于酰胺异构酶家族，广泛存在于真核细胞中。FKBPs具有多种生物学功能，其主要作用为招募钙调素、细胞凋亡和信号转导等方面。FKBPs的丰富结构和功能特性使其成为广泛的核心细胞调控因子。
家蚕中的BmFKBP45基因编码了一种别嘌呤酸结合蛋白，它与草履虫Pirin类似，并且早期的研究表明，BmFKBP45基因在生长和发育中发挥重要作用。然而，其具体功能和调控机制仍然没有得到深入的解析。
本研究旨在分析BmFKBP45基因在家蚕不同组织中的表达情况及其对环境胁迫的响应，以及通过RNAi技术敲低BmFKBP45基因表达验证其在家蚕生长和发育中的作用。
Materialsandmethods：
实验材料
家蚕种群来自于浙江农业科学院昆虫研究所，其完全生长期的幼虫在室温下孵化和饲养。
核酸提取和RT-PCR实验
使用RNeasyMiniKit（Qiagen）从家蚕幼虫中提取总RNA，然后根据说明书的方法制备cDNA。根据BmFKBP45基因序列设计特异性引物，并进行RT-PCR实验。
Westernblot实验
幼虫组织样品收集后，使用SDS-PAGE电泳将细胞蛋白分离。将分离后的样品在Nitrocellulose膜上转移，并用特异性抗体检测BmFKBP45的蛋白表达水平。
RNAi技术
RNAi技术用于沉默家蚕BmFKBP45基因的表达。在幼虫最后一次蜕皮前，在软脱皮期使用转染剂将dsRNA注入到家蚕体内。
结果：
BmFKBP45基因在家蚕不同组织中表达
通过RT-PCR分析发现，BmFKBP45基因在家蚕不同组织中均有表达。其中，在肠道和脂肪体中的表达量较高，而在头部和鳞片中的表达量相对较低（图1）。
图1：BmFKBP45在家蚕不同组织中的表达
BmFKBP45基因对高盐胁迫和低温胁迫的响应
在高盐胁迫下，BmFKBP45基因的表达量明显上调，而在低温胁迫下，BmFKBP45基因的表达量也有所上升（图2）。
图2：高盐胁迫和低温胁迫下BmFKBP45基因表达的变化
RNAi敲低BmFK