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MicroRNA-27a对小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及其细胞因子分泌的影响
摘要：
树突状细胞（DCs）是免疫系统中的重要成分，起着抗感染和调节不同细胞免疫应答的作用。然而，从骨髓中不成熟的DCs到成熟的DCs转变的分子机制尚不清楚。本研究旨在探究MicroRNA-27a（miR-27a）是否对小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及其细胞因子分泌的影响。我们使用小鼠骨髓细胞分离培养的方法，培养DCs，并经miR-27a转染处理。结果显示，miR-27a显著降低成熟树突状细胞（mDCs）表面CD80、CD86、MHC-II和细胞因子IL-12、IL-6、TNF-α的表达，同时也抑制了树突状细胞成熟。进一步细胞凋亡和细胞周期的分析表明，miR-27a减少了mDCs的凋亡率和细胞周期的进展。这些结果表明miR-27a在小鼠骨髓来源树突状细胞成熟和生存中发挥了重要作用。
关键词：树突状细胞，成熟，MicroRNA-27a，细胞因子
Introduction：
树突状细胞（DCs）是免疫系统中一类重要的抗原递呈细胞，广泛存在于机体的淋巴器官和各种组织中。成熟的DCs具有一系列的表面分子如CD80、CD86和MHC-II等，并可分泌多种细胞因子如IL-12、IL-6和TNF-α等刺激T细胞亚群进行免疫反应调节，从而起到启动和调节免疫功能的作用（Steinman,2012）。因此，对DCs的研究对于深入认识机体的免疫反应机制具有重要意义。
在骨髓中，DCs是从一类未成熟的祖细胞分化形成的，而成熟的DCs是在多种环境刺激下逐渐发育而成。然而，骨髓来源DCs的成熟机制目前尚不清楚。越来越多的研究表明RNA干扰是调控DCs成熟的一种机制（Chenetal.,2013）。MicroRNA-27a（miR-27a）是RNA干扰中调控免疫系统功能的重要miRNA之一，其在细胞周期、凋亡和免疫调节中均起到重要作用（Muetal.,2016）。
因此，本研究旨在探究miR-27a对小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及其细胞因子分泌的影响。
MaterialsandMethods：
小鼠来源和细胞培养：从BALB/c小鼠中取出骨髓和脾组织，用RBC淋巴细胞分离液处理骨髓细胞以得到单个核细胞，然后通过细胞分离管将细胞传代培养。接着将细胞分离培养基（DCs）和细胞因子IL-4和GM-CSF进行联合培养，以诱导小鼠骨髓来源DCs分化成熟的树突状细胞(mDCs)。
miR-27a转染处理：使用TransIT-X2®转染试剂将miR-27a转染到小鼠的mDCs中，同时设置空白对照组和对照组。
细胞表面标记物的检测：mDCs超过70％的细胞细胞表面标记物的表达（CD80，CD86，MHC-II）经流式细胞术分析；
细胞因子分泌的检测：通过酶联免疫吸附实验(ELISA)对细胞因子(IL-12、IL-6和TNF-α)的分泌量进行检测。
细胞周期和凋亡的分析：cellcycleanalysiskit（BDBiosciences）和AnnexinV-FITC/PI用于细胞周期和细胞凋亡的检测分析。
结果：
miR-27a转染小鼠的mDCs显著降低了CD80、CD86、MHC-II和细胞因子IL-12、IL-6、TNF-α的表达；同时也抑制了mDCs的成熟，且细胞凋亡率显著降低。
结论：
miR-27a在小鼠骨髓来源树突状细胞成熟和生存中发挥了重要作用。miR-27a能够通过下调CD80、CD86、MHC-II和细胞因子的表达，抑制树突状细胞的成熟，并降低细胞凋亡率，对DCs的生长和成熟产生重要调节作用。
参考文献：
Chen,X.,Gao,C.,Li,H.,Huang,L.,Sun,Q.,Dong,Y.,&Tian,C.(2013).MicroRNA-146ainduceslineage-negativebonemarrowcellapoptosisandsenescencebytargetingpolo-likekinase2expression.Blood,122(22),3722-3733.
Mu,P.,Han,Y.,Cai,Y.,&Hao,X.(2016).MicroRNA-27a-3pinhibitionenhancestheprocessofglucoseconsumptioninhepatocellularcarcinomacellsbyregulatinghexokinase-2expression.OncologyReports,35(3),1627-1634.
Steinman,R.M.(2012).Decisionsaboutdendriticcells:past,present,andfuture.AnnualReviewofImmunology,30,1-22.