流式细胞术与其临床应用.pptx

流式细胞术与其临床应用流式细胞术1930Caspersson&Thorell
细胞计数计算机与分析系统（一）流动室与液流系统（一）流动室与液流系统（二）激光光源与光学系统（二）激光光源与光学系统（二）激光光源与光学系统滤光片的组成
长通(Longpass，LP)滤片：只允许特定波长以上的光束通过
短通(Shortpass，SP)滤片：只允许特定波长以下的光束通过
带通(Bandpass，BP)滤片：只允许一定波长范围内的光束通过
（二）激光光源与光学系统光信号的类型
散射光信号：与标记荧光素无关，
是细胞的固有参数
前向散射光(forwardscatter,FSC)
侧向散射光(sidescatter,SSC)

荧光信号
自发荧光：微弱
特异荧光：标记的荧光素分子发出
的荧光，比自发荧光强很多倍
（一）前向散射光FSC
FSC信号方向与激光束平行，偏离度一般在1-6度范围内，亦称小角度散射光，主要反映被测细胞的体积大小（二）侧向散射光SSC
SSC方向与激光束和液流形成的平面相垂直，亦称90度散射光，其信号强度反映细胞内部颗粒度和精细结构的变化。R1:淋巴细胞
R2:单核细胞
R3:中性粒细胞
R4:裂解碎片（三）荧光信号
荧光：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光（三）荧光信号
细胞经过特异荧光素标记后，受激发光照射得到的荧光信号，通过对这类荧光信号的检测就能了解所研究细胞参数的存在与定量（三）荧光信号
常用荧光素（三）荧光信号
常用荧光素（三）荧光信号（三）荧光信号FL-AFACSCalibur流式细胞仪信号检测系统（四）计算机和分析系统直方图（Histogram）直方图（Histogram）散点图(DotPlot)散点图(DotPlot)等高图和等密度图（四）计算机和分析系统门(Gate，简写G)是流式细胞术中的一个重要术语，FCM数据分析过程实际上就是选门和设门的过程矩形十字门流式细胞术的最大特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获得多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选
细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量
目前国内主要流式细胞仪厂家
EpicsXL单激光四色，分析型BD公司分析型流式细胞仪BD公司分析型流式细胞仪FACSVantageSEBDFACSCantoII淋巴细胞亚群
HLA-B27
CD55、CD59检测
CD34造血干细胞计数
白血病和淋巴瘤免疫分型
TH1/TH2细胞检测
血小板活化
炎症感染指标CD64
网织红细胞/血小板检测
微小残留病灶（MRD）
肿瘤细胞倍体（DNA）
细胞凋亡
……
标本的种类：
血液、骨髓穿刺液、各种体液（胸水、腹水、脑脊液）、组织（如淋巴
结、肝、脾）及肺泡灌洗液等
抗凝剂：
外周血：EDTA、肝素和枸橼酸均可
骨髓：肝素（推荐）、EDTA
血小板：枸橼酸
储存时间：
EDTA：24～48h
肝素：48～72h
枸橼酸：72h
严重溶血、凝血或坏死的样本应弃用

淋巴细胞亚群分析临床意义——反应体内免疫状态
CD4+T降低：病毒感染、恶性肿瘤、免疫缺陷病、免疫抑制剂使用
CD8+T增高：病毒及结核杆菌感染，自身免疫性疾病活动期、肿瘤、慢性活动性肝炎
CD4/CD8降低：处于免疫抑制状态
免疫缺陷病：如艾滋病时的比值常显著小于0.5
某些恶性肿瘤：如肝癌、食道癌、肺癌、膀胱癌等
某些病毒感染：HBV、EB、CMV等
NK细胞（CD3—CD16+和/或CD56+）能够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用
淋巴细胞亚群分析HLA-B27检测临床意义：
强直性脊柱炎（高度相关，90%）
Reiter’s综合征（70-90%）
银屑病关节炎（50-60%）
急性前葡萄膜炎（40-50%）PNH诊断Normal造血干细胞计数蓝色－荧光微球（数量已知）；红色－CD34＋细胞临床意义：
血液系统疾病的造血干细胞移植
数量的检测
采集时机的确定
白血病和淋巴瘤免疫分型分型方案：CD45设门，四色标记，
临床意义：
客观、快速地分析
确定异常细胞系来源及分化阶段
判断预后正常骨髓细胞CD45/SSCAML-M1ALL(B)临床意义：CD4/CD8
结节病
特发性肺间质纤维化
肺部肿瘤疾病Th1/Th2细胞检测TH1/TH2细胞检测TH1/TH2细胞检测感染性疾病CD64检测感染性疾病CD64检测液相芯片技术CBA液相芯片技术CBA液相芯片技术CBA思考题THANKYOU!