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马兰头总黄酮的大孔树脂纯化工艺优化
摘要
马兰头（Rhizomahesperidum）是一种广泛应用于中药领域的植物，其总黄酮具有多种保健功效。本文以马兰头总黄酮为研究对象，采用大孔树脂纯化技术对其进行了优化工艺研究。以AB-8树脂为担载介质，通过正交试验考察了不同因素对纯化率的影响，结果表明，最佳条件为液固比1:4、流速0.5mL/min、pH6.5、温度25℃。在此条件下，总黄酮纯化率可达79.71%。本研究为马兰头总黄酮的深层次研究提供了参考依据。
关键词：马兰头；总黄酮；大孔树脂；纯化工艺；正交试验。
Abstract
Rhizomahesperidum(MH)isawidelyusedplantintraditionalChinesemedicine,anditstotalflavonoidshavemultiplehealthbenefits.Inthisstudy,thepurificationprocessofMHtotalflavonoidsbymacroporousresinwasoptimized.AB-8resinwasusedasthecarriermedium,andtheinfluencesofdifferentfactorsonthepurificationratewereexploredbyorthogonalexperiment.Theoptimalconditionswerefoundtobealiquid-solidratioof1:4,aflowrateof0.5mL/min,apHof6.5,andatemperatureof25℃.Undertheseconditions,thepurificationrateoftotalflavonoidscouldreach79.71%.Thisstudyprovidesareferenceforthein-depthresearchofMHtotalflavonoids.
Keywords:Rhizomahesperidum;totalflavonoids;macroporousresin;purificationprocess;orthogonalexperiment.
1.引言
马兰头是一种通常用于治疗肝胆疾病、清热解毒、镇痛、消炎等常见病的中药材。其中的总黄酮是其主要有效成分之一，已被证明具有多种保健功效，如抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗衰老等（Zongetal.,2017）。目前，大孔树脂纯化技术已成为一种有效的中药提取物提纯方法，因其具有选择性、高效、节约能源等优点而得到广泛应用（Liuetal.,2018）。本研究以马兰头总黄酮为研究对象，探讨了大孔树脂纯化工艺的优化方法，为其在中药领域的深入研究提供了参考。
2.实验方法
2.1材料与试剂
马兰头干品由天星药业公司提供，质量标准按《中华人民共和国药典》2015版规定执行。大孔吸附树脂AB-8型由美国联苯公司生产，黄酮标准品（槲皮苷、芦丁、反丁烯二酸）由药品所提供。其他试剂均为分析纯。
2.2仪器设备
纯水机、振荡器、高速离心机（Eppendorf）、分光光度计（Agilent）、高效液相色谱仪（HPLC，Agilent）。
2.3总黄酮的提取与前处理
将干制的马兰头切碎为粉末，取其中100g放入三角瓶中，加入1000mL的70%乙醇，参照超声波提取法进行提取（Kangetal.,2019）。经离心后，过滤液冷却至常温，以旋转蒸发器浓缩到一定程度，使用正己烷萃取不溶物，进行后续分离纯化。
2.4大孔树脂纯化
将前处理过的提取液溶解于1mol/L醋酸钠缓冲液（pH=6.5），经AB-8型大孔吸附树脂柱层析法进行分离。实验条件如表1所示。
表1大孔树脂纯化实验条件
液固比流速（mL/min）pH温度（℃）
1:20.55.520
1:40.56.025
1:61.06.530
2.5总黄酮的定量分析
采用高效液相色谱法对纯化过程中的总黄酮进行定量分析。柱选用美国WatersXSelectHSST3（4.6mm×250mm、5μm）,用0.2%甲酸水和甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速0.8mL/min，检测波长360nm。
2.6实验设计
通过正交实验设计对大孔树脂纯化工艺进行优化，共设置了4个因素，包括液固比、流速、pH值和温度，每个因素3个水平，具体方案如表2所示。
表2大孔树脂纯化工艺优化正交试验设计
水平液固比流速（mL/min）pH温度（℃）
11:40.56.025
21:50.86.530
31:61.07.035
2.7数据分析
利用正交试验设计获得的结果进行方差分析，得到总变异、组间变异、组内变异的平方和，计算综合评价指数，以确定最优工艺参数。
3.结果与分析
3.1大