质粒的酶切—琼脂糖凝胶电泳分离DNAppt课件.ppt

实验二质粒的酶切、琼脂糖凝胶电泳分离DNA实验目的
实验原理
实验仪器、材料与试剂
实验步骤
实验结果及讨论实验目的实验原理pBCSKmap
（二）材料

实验一中提取的质粒DNA和酶切后的质粒DNA。
（三）试剂

1.限制性内切酶EcoRI，
2.TAE电泳缓冲液(50×)（pH8.0）
Tris242g
冰醋酸57.1ml
0.5mol/LEDTA（pH8.0）100ml
3.溴化乙锭溶液10mg/ml水溶液，室温，棕色瓶或铝铂纸包装保存。
4.10×DNA样品上样缓冲液
5.琼脂糖
实验步骤琼脂糖凝胶制备6.室温下约30-45分钟后，琼脂糖溶液完全凝固，小心垂直拔出梳子和挡板，清除碎胶，将凝胶放入电泳槽中。
7.加入电泳缓冲液（1×TAE）至电泳槽中，使液面高于胶面约1mm。
8.在DNA样品中加入2μL(1/10体积)的10×DNA上样缓冲液(loadingbuffer)，混匀，稍甩一下，使溶液都处于离心管底。
9.用移液器吸起离心管中溶液，移入凝胶的梳孔中。
10.插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调节电压至120V，电泳开始，观察电流情况或电泳槽中负极的铂金丝是否有气泡出现。
11.等溴酚蓝泳动至凝胶前沿后，将电压（或电流）回零，关闭电源，停止电泳。
12.取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果。
13..根据需要切下DNA条带，放入1.5mlEp管中，放于4℃保存，以备下周实验用。
实验结果及讨论使用3mg的DNAMarkerDL2,000（500ng/条带）进行1%的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb，750bp，500bp，250bp，100bp。