第八章+酶免疫技术ppt课件.ppt

教学目的要求：
1.掌握酶和酶作用的底物、酶标记的抗体或抗原；熟练掌握固相载体。
2.熟练掌握酶免疫技术的分类
3.熟练掌握酶联免疫吸附试验的方法类型及原理
4.掌握酶免疫测定的应用放射免疫技术基本原理基本原理DH2+H2O2→→→D+2H2O邻苯二胺OPD反应后显橙黄色，加酸终止反应后呈棕黄色，测定波长492nm。不稳定，有致癌性。（二）碱性磷酸酶
（alkalinephosphatase，AP)（三）β-半乳糖苷酶
（β-galactosidase，β-Gal）二、酶标记抗体或抗原（一）酶标记抗体或抗原的制备制备方法（二）酶标记物的纯化与鉴定2.酶标记物的鉴定三、固相载体（一）固相载体的要求（二）固相载体的种类（三）包被与封闭以聚笨乙烯固相载体（如制ELISA板）为例说明免疫吸附的过程：
抗原（抗体）→用PH9.6的碳酸盐溶液稀释→4ºC过夜→用10%的小牛血清再包被一次，以消除固相载体表面未吸附的位点，此过程叫做封闭。第二节酶免疫技术的分类一、均相酶免疫测定法一、均相酶免疫测定法二、异相液相酶免疫测定法第三节酶联免疫吸附试验（ELISA）二、方法类型及反应原理E（1）将已知抗体包被于固相反应板上，洗涤。
（2）加待检标本,温育，洗涤。
（3）加酶标抗体，洗涤。
（4）加底物，根据颜色反应的程度进行该抗原的
定性或定量。（+）2.双位点一步法检测抗原E
如果待检标本中抗原浓度过高，容易形成“钩状效应（hookeffect）”。钩状效应严重时，可出现假阴性结果，必要时可将待检标本适当稀释后重新测定。3.竞争法检测抗原酶标抗原（1）将特异性抗体包被于固相反应板上，洗涤。
（2）待测管中加待检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，待检标本中如果含有抗原，则与酶标抗原竞争固结合相抗体，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。对照管中只加酶标抗原，温育，洗涤。
（3）加底物显色。对照管中颜色深，待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。
（二）检测抗体的方法
2.双抗原夹心法4.加酶作用的底物
不显色3.竞争法检测抗体（1）竞争法检测HBcAb：
①将HBcAg包被于固相反应板上，洗涤。
②加入待检标本和酶标特异性抗体，温育，洗涤。
③加入底物，温育，形成有色产物，用酶标比色仪测定结果。显色深浅与待检标本中相应抗体含量成反比。3.加酶作用的底物
显色（2）竞争法检测HBeAb：
①将HBeAb包被于固相反应板上，洗涤。
②加入待检标本和HBeAg，温育，洗涤。
③加入酶标HBeAb，温育，洗涤。
④加入底物，温育，形成有色产物，用酶标比色仪测定结果。显色深浅与待检标本中相应抗体含量成反比。固相抗体4.捕获法固相抗人lgM抗体5.加酶作用的底物
不显色方法评价试剂盒（图为瑞士HAMILTONFAME24/20全自动酶免分析仪）1．病原体及其抗体测定广泛应用于传染病的诊断。
2．蛋白质测定各种免疫球蛋白、补体组分、肿瘤标志物各种血浆蛋白质、同工酶等。
3．非肽类激素测定如T3、T4、雌激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素等。
4．药物和毒品测定如地高辛、苯巴比妥、庆大霉素、吗啡等。小结展望练习1.用于标记的HRP的RZ值应该大于
A.2.4
B.3.0
C.1.5
D.3.5
E.5.01.用于标记的HRP的RZ值应该大于B
A.2.4
B.3.0
C.1.5
D.3.5
E.5.02.RZ表示
A酶活性
B.催化效率
C.标记率
D.酶纯度
E效价2.RZ表示D
A.酶活性
B.催化效率
C.标记率
D.酶纯度
E.效价3.HRP与底物TMB反应后的测定波长为
A.278mm
B.450mm
C.403mm
D.495mm
E.492mm3.HRP与底物TMB反应后的测定波长为B
A.278mm
B.460mm
C.403mm
D.495mm
E.492mm5.HRP与TMB反应后，加H2SO4终止反应前呈
A.蓝色
B.橙黄色
C.棕黄色
D.黄色
E.紫色5.HRP与TMB反应后，加H2SO4终止反应前呈D
A.蓝色
B.橙黄色
C.棕黄色
D.黄色
E.紫色6.辣根过氧化物酶（HRP）的受氢底物为
A.OPD
B.TMB
C.DAB
D.H2O2
E.Eu6.辣根过氧化物酶（HRP）的受氢底物为D
A.OPD
B.TMB
C.DAB
D.H2O2
E.Eu7.ELISA常用的固相材料为
A.NC膜
B.聚苯乙烯
C.磁性颗粒
D.尼龙膜
E.凝胶7.ELISA常用的固相材料为B
A.NC膜
B.聚苯乙烯
C.磁性颗粒
D.尼龙膜
E.凝胶8.目前国内ELISA常用的酶是
A.HRP
B.AP
C.β-Gal
D.OPD
E.TMB8.目前国内ELISA常用的酶是A
A.HRP
B.AP
C.β-Gal
D.OPD
E.T