生物技术在食品致病微生物检测中的应用专家讲座.pptx

食品中致病微生物检测技术食品中致病微生物检测技术1.聚合酶链反应（PCR）李秀娟等（年）对117株金黄色葡萄球菌nuc片段进行了PCR扩增和焦磷酸测序，结果显示所建立PCR方法能对117株金葡菌进行准确检测，焦磷酸测序结果一致性深入验证了PCR扩增结果特异性，说明该方法针对当前所用研究菌株而言，还未出现假阳性和假阴性结果，含有较高特异性。传统PCR技术在实际应用中表现出一些缺点，比如只能定性而不能定量地检测，且在有死细菌存在情况下轻易产生假阳性、不能检测致毒微生物产生毒素等。
伴随各项新技术出现以及与PCR技术有机结合，发展起来了一系列改进PCR技术。
当前应用方法主要有实时荧光定量PCR、多重PCR以及PCR联合技术等。实时荧光定量PCR杨柳等（年）依据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采取基因重组技术构建用于沙门氏菌检测定量标准品，成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法，含有很好特异性、敏感性、稳定性和重复性。多重PCRPCR联合技术刘成志等（年）依据志贺氏菌ipaH基因保守序列设计特异性引物，筛选适当DNA模板制备方法，采取快速常规PCR和定量实时PCR结合，对培养液中及乳饮料阳性样品中志贺氏菌进行检测，建立乳饮料中快速检测志贺氏菌有效方法。
杨大伟等（年）应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术，以A型肉毒梭菌A型肉毒神经毒素基因作为靶基因设计特异性引物，PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测，最低检出限可到达为111ng/tube，该方法能够快速、准确检测A型肉毒梭菌。2.核酸探针技术微生物经过处理后固定于另一固相表面上,经洗涤变性后加入DNA探针进行杂交，DNA探针能够与同源性靶DNA进行互补性结合，依据指示剂选取适当方法进行检测。当前，DNA探针技术已经在沙门氏菌、产肠毒素大肠杆菌及乙型肝炎病毒等检测中得到了应用。􀀁
续文彬(年)针对单增李斯特氏菌hly部分基因设计探针，对肠炎沙门氏菌，大肠埃希氏菌，绿脓假单抱病菌，空肠/结肠弯曲杆菌等非单增李斯特氏菌经杂交保护分析后，只有单增李斯特氏菌为阳性结果，含有很好特异性。
薛力刚等（年）经过吖啶酯标识核酸探针方法检测病原菌，核酸探针与待检样品中金黄色葡萄球菌rRNA序列进行杂交，形成稳定DNA:RNA杂交体，使用碱液破坏未杂交探针，在碱性过氧化氢中检测发光。核酸探针法检测金黄色葡萄球菌大大缩短了检测周期，且特异性和敏感性较高，为金黄色葡萄球菌判定提供了一个新方法。3.基因芯片技术陈昱等(年)利用芯片技术对志贺氏菌等26株食源性微生物进行检测，最终成功建立了检测和判定志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157方法，为3种食源性致病菌快速检测和判定提供了准确、快速、灵敏方法。
贺晨等（年）筛选志贺氏菌、肠炎沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌O157等11种特异基因作为目标基因，建立了一个利用多重PCR方法结合基因芯片技术快速、准确检测11种常见致病菌方法，为流行病学调查和传染性疾病早期诊疗和判定提供了一个有效检测伎俩。陆长勇（年）针对金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、单核细胞增生李斯特菌等8种常见食源性致病菌建立了基于单碱基延伸标签反应原理基因芯片检测方法，其灵敏度可到达0.1pg，以鼠伤寒沙门氏菌为单一检测对象细菌纯培养物灵敏度可到达5×102CFU/mL。结语参考文件[6]杨大伟,刘云国,谭乐义.食品中A型肉毒梭菌PCR-DHPLC检测方法建立[J].食品工业科技,(6):398-400.
[7]续文彬.单增李斯特氏菌液相核酸探针检测方法建立与初步应用.吉林农业大学硕士学位论文,,28-31.
[8]薛力刚,刘金华,王全凯.金黄葡萄球菌核酸探针检测方法建立[J].中国生物制品学杂志.,23(1):91-94.
[9]陈昱,潘迎捷,赵勇等.基因芯片技术检测3种食源性致病微生物方法建立[J].微生物学通报,,36(2):285-291.
[10]贺晨,孙鸿燕,邵丽筠等.多重PCR结合基因芯片技术检测11种致病菌方法建立.中国试验诊疗学,,15(4):587-591.
[11]陆长勇,施春雷,张春秀等.基于单碱基延伸标签反应常见食源性致病菌基因芯片检测方法建立[J].生物工程学报,,25(4):554-559.

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