微生物的生长及其控制ppt课件.ppt

第五章微生物的生长及其控制第一节微生物生长
1微生物生长的概念
微生物在适宜的外界环境条件下，不断地吸收营养物质，并按自身的代谢方式进行新陈代谢，如同化作用大于异化作用，其结果是原生质的总量（包括重量、体积、大小）不断地增加，称为微生物的生长现象。生长定义为微生物细胞在群体水平上增加，也可以认为是微生物群体数量增加。许多微生物是以二分裂的方式生长的。一般细胞分裂和染色体复制是协调控制的。
单细胞微生物如细菌的生长，往往伴随着细胞数目的增加。当细胞增长到一定程度时，就以二分裂方式，形成两个相似的子细胞，子细胞又重复上述过程，使细胞数目增加，称为繁殖。在多细胞微生物中，例如某些霉菌，细胞数目的增加如不伴随着个体数目的增加，只能叫生长，不能叫繁殖。例如菌丝细胞的不断延长或分裂产生同类细胞均属生长，只有通过形成无性孢子或有性孢子使得个体数目增加的过程才叫做繁殖。
在一般情况下，当环境条件适合，生长与繁殖始终是交替进行的。从生长到繁殖是一个由量变到质变的过程，这个过程就是发育。

生长是细胞逐步发生的量变过程，
繁殖是产生新的细胞个体的质变过程，伴随着细胞总数的增加。
个体生长→个体繁殖→群体生长
群体生长=个体生长+个体繁殖
微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体生长很难测定，意义也不大。通常测定微生物的生长是测群体的生长，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。
测生长量的方法如下：
测定生长量的方法有许多种，适用于一切微生物。
2生长量的测定：
一、直接法
1．测体积它是一种较为粗放的方法，例如将待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。
2．称干重采用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10~20%。如用离心法，将待测培养液离心，再用清水洗涤离心1~5次后干燥，可用105℃、100℃或红外线烘干，也可在较低的温度（80℃或40℃）下进行真空干燥，然后称干重。如细菌一个细胞一般重10-12~10-13g。如为丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜进行过滤。过滤后，细胞可用少量水洗涤，再真空干燥（40℃以下），称干重。以乳酸菌为例，在液体培养基中，细胞的浓度大约为2×108个/ml。100ml培养物可得10~70mg干重的细胞。
二、间接法
1、生理指标法与生长量相平行的生理指标很多，它们均可用作生长测定的相对值。
（1）测定细胞总含氮量来确定细菌浓度大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%。总氮量与细胞粗蛋白的含量（因其中包括了杂环氮和氧化型氮）的关系可用下式计算：
粗蛋白总量=含氮量%×6.25含氮量的测定方法有很多，常用凯氏定氮法。此法适用于细胞浓度较高的样品，同时操作过程也较麻烦，主要用于科学研究中。
（2）含碳量的测定微生物新陈代谢的结果，必然要消耗或产生一定量的物质，以表示微生物的生长量。一般生长旺盛时消耗的物质就多，或者积累的某种代谢产物也多。将少量生物材料混入1ml水或无机缓冲液中，用2ml2%重铬酸钾溶液在100℃下加热30分钟，冷却后，加水稀释至5ml，在580nm波长下测定光密度值（用试剂作空白对照，并用标准样品作标准曲线），即可推算出生长量。
（3）其它磷、DNA、RNA、ATP和N–乙酰胞壁酸等的含量，以及产酸、产气、产CO2（用标记葡萄糖作基质）、耗氧、粘度和产热等指标，均可用于生长量的测定。
2、比浊法微生物在液体培养基中生长，由于原生质含量的增加，引起培养物混浊度的增高。最古老的比浊法是采用McFarland比浊管，用不同浓度的Bacl2与稀H2SO4配制成的10支试管，其中形成的BaSO4有10个梯度，表示10个相对的细菌浓度（预先用相应的细菌测定）。某一未知浓度的菌液在透射光下用肉眼与某一比浊管进行比较，如果两者的浊度相当，即可目测出该菌液的大致浓度。
精确的测定，要用分光光度计进行。在可见光的450~650nm波长内均可测定。

48+2h计数的方法实验次数检样
2、液体稀释法对未知样品作10倍系列稀释。选适宜的3个连续的10倍稀释液各取3ml，接种到3组共9支液体培养基试管中，每管接入1ml，培养一定的时间后，记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查MPN（mostprobablenumber，最近似数）表，根据样品的稀释倍数可计算出其中的活菌含量。
3、细胞混浊度的测定估计细胞数目和粗重的一较快和适用的方法是使用混浊度测定法。一个细胞悬浮液用肉眼观察是呈现浑浊的，这时因为光线通过悬浮液时，细胞散射光线。存在的细胞数越多，分散的光线就越多，因此悬浮液浊度就越大。可以用光度计或分光光度计测量混浊度，分光光度计和光度计射出的光线通过细胞悬浮液时，就可以检测出没有被细胞散射的光线。

3微生物群体生长的规律在培