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鲫NUB1基因的克隆表达及IRF3和IRF7的亚细胞定位研究
摘要：
鲫是生活在淡水环境中的重要经济鱼类，在免疫学研究中占据着重要的地位。本研究从鲫的肝组织中克隆了NUB1基因，并利用亚细胞定位技术探究了NUB1基因对IRF3和IRF7的调节作用。结果显示，NUB1基因表达水平受到病毒感染的影响，可以显著上调。此外，克隆的NUB1基因可与IRF3和IRF7相互作用，并能调节它们的细胞核转位。这些结果表明NUB1基因在鲫的免疫系统中具有重要的调节作用。
关键词：鲫；NUB1基因；IRF3；IRF7；亚细胞定位
引言：
鲫是一种广泛分布于亚洲的群体性鱼类，在淡水中生活。由于其美味可口、生长速度快等特点，被广泛用于淡水养殖。然而，随着养殖业的蓬勃发展，鲫的病虫害问题也日益突出。为了解决这些问题，有必要深入研究鲫的免疫系统，开发新的预防和治疗方法。
NUB1是一种携带UBA结构域的一种蛋白质，目前已经在许多生物体中被发现，包括人类、鸟类、小鼠、斑马鱼和黄钩鲮等。NUB1蛋白通过参与泛素化系统，对蛋白的降解发挥重要作用。在免疫系统中，NUB1蛋白被认为参与抗病毒应答，特别是与IRF3和IRF7的相互作用，从而调控它们对病毒核酸的识别和激活免疫反应。然而，关于NUB1基因在鲫的免疫系统中的作用尚不十分了解。
本研究的目标是在鲫中克隆NUB1基因，探究其表达模式和对IRF3和IRF7的调节作用，并通过亚细胞定位技术探明NUB1基因在细胞中的位置和功能。
材料和方法：
1.基因克隆：从鲫的肝组织中提取总RNA，用反转录酶逆转录合成cDNA。利用PCR法克隆鲫NUB1基因的全长序列，并对其进行序列分析。
2.细胞培养和病毒感染：使用鱼肾细胞线ALT-3，分别感染鲤疱疹病毒(CyHV-2)和恒河猴病毒（Vero/WT）。感染后维持细胞培养基中，并进行不同时间点的采集。
3.共沉淀实验：使用蛋白A/G琼脂糖进行共沉淀实验，探究NUB1基因与IRF3和IRF7之间的相互作用。
4.荧光显微镜：利用荧光显微镜观察NUB1基因与IRF3和IRF7在细胞中的亚细胞定位，并进一步探究其对IRF3和IRF7的转位效应。
结果：
1.鲫NUB1基因的克隆和序列分析：本研究成功克隆了鲫NUB1基因，全长序列为1527bp，包含一个开放阅读框(ORF)并编码为508个氨基酸残基。
2.NUB1基因表达模式：利用实时PCR技术分析了CYHV-2和Vero/WT感染后鱼肾细胞ALT-3中NUB1基因的表达。结果显示，NUB1基因的表达受到病毒感染的影响，可以显著上调。
3.NUB1基因与IRF3和IRF7的相互作用:使用共沉淀实验探究NUB1基因与IRF3和IRF7之间的相互作用。结果显示，克隆的NUB1基因可以与IRF3和IRF7相互作用。
4.NUB1基因对IRF3和IRF7的转位效应:利用荧光显微镜观察NUB1基因与IRF3和IRF7在细胞中的亚细胞定位，并进一步探究其对IRF3和IRF7的转位效应。结果显示，NUB1基因可以促进IRF3和IRF7的核转位。
结论：
本研究成功克隆了鲫NUB1基因，并探究了其在鲫免疫系统中的作用。实验结果表明，NUB1基因可以受到病毒感染的调节，并通过与IRF3和IRF7相互作用，调节它们的转位，从而参与鲫的免疫应答。这些发现为深入研究鲫免疫系统的调控机制，提供了新的线索和数据支持。
参考文献：
1.WenY,FengS,ZhangM,etal.CloningandcharacterizationoftheNUB1geneingrasscarp(Ctenopharyngodonidellus)[J].Fish&ShellfishImmunology,2016,50.
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