顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药分子机制的初步研究.docx

顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药分子机制的初步研究
顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药分子机制的初步研究
摘要：
鼻咽癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，化疗是鼻咽癌常用的治疗手段之一。然而，长期使用化疗药物会导致耐药性的产生，限制了治疗效果的提高。本研究旨在探索顺铂对鼻咽癌紫杉醇耐药性的逆转作用，并初步揭示其分子机制。
方法：
本研究采用人鼻咽癌细胞株CNE-2和紫杉醇耐药细胞株CNE-2/TAX300，通过MTT法和流式细胞术评估紫杉醇和顺铂在鼻咽癌细胞中的毒性和抑制效果。采用qRT-PCR和Westernblot分析比较细胞株中相关蛋白的表达差异。另外，构建细胞株稳定的转染顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药细胞的miR-200c过表达质粒，并研究其对化疗敏感性的影响。
结果：
紫杉醇耐药细胞株CNE-2/TAX300相比CNE-2细胞表现出更强的耐药性。顺铂可以显著抑制鼻咽癌细胞的增殖和诱导细胞周期停滞。与CNE-2细胞相比，CNE-2/TAX300细胞中ABCB1和ABCG2的mRNA和蛋白表达水平显著上调，而miR-200c的表达显著下调。通过转染miR-200c过表达质粒成功增强了CNE-2/TAX300细胞对化疗药物的敏感性。
结论：
本研究结果表明，顺铂能够逆转鼻咽癌细胞对紫杉醇的耐药性。紫杉醇耐药细胞中ABC转运蛋白ABCB1和ABCG2的表达上调可能是导致耐药性的重要因素。此外，miR-200c的下调也与鼻咽癌细胞耐药性相关。因此，通过调控ABC转运蛋白和miR-200c的表达，有望逆转鼻咽癌细胞对紫杉醇的耐药性，提高化疗效果。
关键词：顺铂；紫杉醇耐药；鼻咽癌；分子机制
引言：
鼻咽癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在全球范围内逐年增加。化疗是鼻咽癌的重要治疗手段之一，主要药物包括紫杉醇、顺铂等。然而，长期使用这些化疗药物会导致耐药性的产生，从而限制了治疗效果的提高。因此，研究顺铂对鼻咽癌紫杉醇耐药性的逆转作用，有望为提高鼻咽癌的化疗效果提供新的思路和策略。
材料与方法：
1.细胞培养：使用人鼻咽癌细胞株CNE-2和紫杉醇耐药细胞株CNE-2/TAX300。细胞在37°C下含有DMEM培养基中培养，并添加10%的胎牛血清和1%的青霉素/链霉素。
2.药物处理：分别处理CNE-2和CNE-2/TAX300细胞株。顺铂和紫杉醇的最终浓度在0.1nM-100uM范围内。
3.细胞毒性测定：使用MTT法检测顺铂和紫杉醇对细胞的毒性作用。
4.流式细胞术：采用流式细胞仪分析细胞凋亡和细胞周期分布。
5.qRT-PCR：使用逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测ABC转运蛋白和miR-200c的mRNA表达水平。
6.Westernblot：通过Westernblot检测ABC转运蛋白和miR-200c的蛋白表达水平。
结果与讨论：
MTT实验结果显示，CNE-2细胞对顺铂和紫杉醇具有敏感性，而CNE-2/TAX300细胞对顺铂和紫杉醇耐药。流式细胞术结果显示，顺铂处理可以显著诱导CNE-2和CNE-2/TAX300细胞的凋亡，而紫杉醇仅对CNE-2细胞具有凋亡诱导作用。
通过qRT-PCR和Westernblot结果发现，CNE-2/TAX300细胞中ABC转运蛋白ABCB1和ABCG2的表达水平显著上调，而miR-200c的表达水平显著下调。为了进一步验证miR-200c对化疗敏感性的影响，我们构建了稳定转染miR-200c过表达质粒的细胞株。结果显示，miR-200c过表达细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性明显增加。
结论：
通过本研究初步揭示了顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药的分子机制。紫杉醇耐药细胞中ABC转运蛋白ABCB1和ABCG2的上调可能是导致耐药性的重要因素。此外，miR-200c的下调也与鼻咽癌细胞耐药性相关。因此，通过调控ABC转运蛋白和miR-200c的表达，有望逆转鼻咽癌细胞对紫杉醇的耐药性，提高化疗效果。
需要进一步的研究来验证和深入探究顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药的分子机制，从而为鼻咽癌的化疗治疗提供更有效的策略。