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青花菜游离小孢子培养及其植株再生技术研究
摘要
青花菜（BrassicaoleraceaL.var.botrytis）是我国常见的蔬菜之一。本研究旨在探究青花菜游离小孢子的培养方法及其再生技术。通过对游离小孢子的分离、筛选和培养条件优化，成功地培养出了小孢子悬浮液，并将其用于青花菜植株再生。实验结果表明，在MS培养基中添加0.5mg/L2,4-D和0.1mg/LBA，经过28天的培养，小孢子可以有效地分化为白色愈伤组织。将愈伤组织转移到无激素的MS培养基中，经过21天的培养，可以成功地再生出青花菜植株。本研究为青花菜的繁殖和种质资源保护提供了新思路和技术支持。
关键词：青花菜，游离小孢子，悬浮液培养，愈伤组织，植株再生
1.引言
青花菜是十字花科蔬菜中的一种，其花序和幼花头被叶片包围，形似“白菜花”，也称“西兰花”，是我国常见的蔬菜之一。近年来，随着人们对健康饮食的重视和对生态环境的保护意识的提高，青花菜作为一种营养丰富的绿色蔬菜越来越受到人们的喜爱。因此，对青花菜的繁殖和种质资源保护具有重要意义。
目前，青花菜主要通过种子繁殖，但是种子只有一个体细胞，难以快速繁殖。而小孢子则是植物有性生殖中的一种特殊细胞，具有多倍体性质，能够快速繁殖。因此，利用青花菜小孢子进行悬浮液培养和植株再生，可以有效地提高繁殖效率和种质资源保护能力。
2.材料与方法
2.1材料
青花菜（BrassicaoleraceaL.var.botrytis）小孢子，MS培养基（pH=5.8），2,4-D，6-BA，愈伤组织诱导培养基（LIM），无激素MS培养基（WMS），透明胶质量分数为7%的蔗糖溶液，过氧化氢（H2O2），无菌培养瓶、培养箱等。
2.2方法
2.2.1游离小孢子的分离和筛选
选取生长健壮的青花菜花序，将花序放置在离心管中，加入一定量的80%酒精和0.02%鲁氏液，振荡3min，使小孢子从花序中落出并沉降到液面上。将液面上的小孢子用无菌水洗涤，然后转移到含有0.1%（w/v）透明胶、15%（w/v）蔗糖的MS培养基中，培养温度为25±2℃，发光强度为40μmol·m-2·s-1，光周期为16h/8h（光/暗），筛选出活力较强的小孢子。
2.2.2悬浮液培养和愈伤组织诱导
将分离出来的游离小孢子转移到含有0.5mg/L2,4-D和0.1mg/L6-BA的MS培养基中，培养条件同上，进行悬浮液培养。每隔7天，用吸头取出一定量的悬浮液，查看小孢子的生长情况。
28天后，将小孢子转移到含有0.1mg/L2,4-D和0.1mg/LBA的MS培养基中，诱导愈伤组织的形成。培养温度、光周期等条件同上。
2.2.3植株再生
经过21天的愈伤组织培养，将愈伤组织转移到无激素的MS培养基中，在培养箱中进行光照和温度逐渐提高的处理，进行植株再生。
3.结果与分析
3.1游离小孢子的分离和筛选
将青花菜花序中的小孢子分离出来后，将其转移到含有15%蔗糖的MS培养基中进行培养。在光周期为16h/8h，温度为25±2值的条件下，小孢子生长迅速，7天后发现小孢子已经开始分化。
3.2悬浮液培养和愈伤组织诱导
将培养周期达到28天的小孢子转移到含有0.1mg/L2,4-D和0.1mg/LBA的MS培养基中，28天后发现小孢子分泌了大量的植物生长素和细胞分裂素，形成了白色愈伤组织。
3.3植株再生
将愈伤组织转移到无激素的MS培养基中，经过21天的培养，植物开始生根和出芽。在逐渐提高的温度和光周期条件下，植株逐渐生长，21天后可以得到具有完整根系和叶片的青花菜植株。
4.结论
经过本实验的研究，成功地实现了青花菜小孢子的游离、悬浮液培养和植株再生。本研究为青花菜繁殖和种质资源保护提供了新思路和技术支持。但是，未来还需要进一步探究小孢子培养和植株再生的机制，并进行大规模的应用研究，以提高繁殖效率和生产效益。