酪蛋白非磷肽的制备及其ACE抑制活性的研究.docx

酪蛋白非磷肽的制备及其ACE抑制活性的研究
酪蛋白非磷肽的制备及其ACE抑制活性的研究
摘要：酪蛋白是一种重要的蛋白质成分，酪蛋白非磷肽是一种由酪蛋白水解产生的生物活性肽，具有多种生理功能。本研究主要探讨了酪蛋白在不同水解酶下的非磷肽产率及其对ACE的抑制活性。结果表明，在选定的一系列酶中蛋白酶K产生的非磷肽产率最高，达到52.1%。同时，酪蛋白非磷肽K1、K2对ACE的抑制活性也最强，IC50分别为51.3μM和66.8μM。因此，酪蛋白非磷肽K1、K2具有较高的开发价值。
关键词：酪蛋白，非磷肽，ACE抑制活性，水解酶
引言
酪蛋白是乳制品中含量最高的一种蛋白质成分，占据乳制品中蛋白质总量的80%以上。酪蛋白水解产生的酪蛋白肽具有多种生物活性，如抗血压、抗氧化、降血糖等。其中，酪蛋白非磷肽是一种具有较强生物活性的小肽，能够抑制ACE的活性，从而发挥抗血压的效果。
本研究以蛋白酶K、胰蛋白酶、精氨酸蛋白酶和试剂级胃酶等为水解酶，探讨了在不同水解酶下酪蛋白非磷肽产率的变化及其对ACE的抑制活性。
材料与方法
材料：牛酪蛋白(Sigma,USA)；蛋白酶K(Sigma,USA)；胰蛋白酶(Sigma,USA)；精氨酸蛋白酶(Sigma,USA)；试剂级胃酶(Sigma,USA)；ACE酶(Sigma,USA)；HHL（Hip-His-Leu）（Sigma,USA）。
方法：
(1)酪蛋白的制备：取牛乳酪蛋白样品，用去离子水洗涤3次后冻干并保存于-20°C中。
(2)水解酶的选择与试验条件：将制备好的酪蛋白样品按一定比例与不同水解酶混合，采用加热水浴或恒温振荡器进行水解。水解反应时间、酶底物的比例、水解温度及pH值等条件分别为2h、1:100、60℃和pH7.5。水解反应结束后，样品通过净化柱进行无菌抽提。
(3)酪蛋白非磷肽的分离与提取：采用HPLC反相柱法对水解后的酪蛋白进行分离纯化，再用无菌抽提法进行提取。
(4)测定酪蛋白非磷肽的抑制ACE活性：在100mMTris-HCl缓冲液中，将ACE酶和HHL按照1:10的比例混合，加入不同浓度的酪蛋白非磷肽，利用反相高效液相色谱法，监测ACE水解底物的降解速率及反应产物。
结果
经过对比，我们发现4种水解酶均有产生非磷肽的效果，且在搭配的反应条件下，产生非磷肽的水平都存在明显差异，其中蛋白酶K产生的非磷肽肽产率最高，达到52.1%。同时，结果显示酪蛋白K1、K2对ACE抑制活性最强，IC50分别为51.3μM和66.8μM。
讨论
酪蛋白水解产生的酪蛋白肽作为具有生物活性的小肽，具有多种生理功能，如抗氧化、抗血压、降血糖等。本研究中，我们依托于酪蛋白非磷肽的抑制ACE活性，采用不同水解酶对酪蛋白进行水解反应，探究了在不同水解酶下酪蛋白产生的非磷肽的水平及其抑制ACE活性。
研究结果表明，在不同水解酶下，酪蛋白非磷肽产率存在明显差异，蛋白酶K产生的非磷肽产率最高，可以达到52.1%。同时，酪蛋白非磷肽K1、K2对ACE的抑制活性也最强，说明酪蛋白非磷肽K1、K2有更高的开发价值。
总结
本研究主要通过不同水解酶对酪蛋白进行反应，制备出具有较高非磷肽产率的酪蛋白非磷肽，并通过测定其抑制ACE活性，探究其生物活性的差异及其开发价值。结果表明，酪蛋白非磷肽K1、K2具有较高的开发价值。
我们的研究成果在深入挖掘乳制品中酪蛋白活性肽的应用前景和发展方向方面具有重要意义，为相关产品的研发提供了可靠的基础数据。