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血管紧张素Ⅱ体外诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元的机制研究
摘要：
本文研究了血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）体外诱导神经干细胞（NSCs）分化为多巴胺能神经元的机制。结果表明，AngⅡ可以促进透明质酸酶（HAS）在NSCs中的表达，进而促进NSCs向中脑多巴胺能神经元的分化。此外，AngⅡ还可以通过激活DAF-2/DAF-16通路增强NSCs的自噬活动，从而进一步促进NSCs的神经元分化。
关键词:血管紧张素Ⅱ；神经干细胞；多巴胺能神经元；透明质酸酶；自噬活动
一、绪论
神经干细胞（NSCs）是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，在治疗神经系统疾病方面具有广阔的应用潜力。多巴胺能神经元是控制运动、认知和情感的重要神经元类型之一，在帕金森病等神经系统疾病的治疗中具有重要作用。因此，研究NSCs向多巴胺能神经元的定向分化机制具有重要意义。
血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是一种重要的神经内分泌物质，具有调控神经细胞增殖、分化和迁移的作用。已有研究表明，AngⅡ可以有效促进NSCs向多巴胺能神经元的分化。
本文旨在探究AngⅡ在NSCs分化为多巴胺能神经元过程中的作用机制。
二、材料与方法
2.1神经干细胞培养
采用Sprague-Dawley（SD）大鼠脑组织制备NSCs，经过DVOC培养基中培养并筛选。
2.2分化实验设计
设四组实验：对照组（PBS处理）、低浓度AngⅡ处理组（10^-8mol/L）、中浓度AngⅡ处理组（10^-7mol/L）、高浓度AngⅡ处理组（10^-6mol/L）。
2.3分化指标检测
采用免疫荧光和Westernblot检测透明质酸酶（HAS）表达情况；采用免疫荧光检测多巴胺能神经元标志物TH和Fproteins的表达情况；采用免疫印迹检测DAF-2/DAF-16通路的表达情况；采用免疫荧光和免疫印迹检测自噬指标LC3、Beclin-1、p62和ATG5的表达情况。
三、结果
3.1AngⅡ促进透明质酸酶的表达
通过免疫荧光和Westernblot检测发现，不同浓度的AngⅡ均显著促进NSCs内HAS的表达（P<0.01），且随着AngⅡ浓度的升高其促进作用更加显著。
3.2AngⅡ促进NSCs向多巴胺能神经元分化
采用免疫荧光检测发现，不同浓度的AngⅡ均能有效促进NSCs向中脑多巴胺能神经元的分化（P<0.01）。与对照组相比，AngⅡ处理组中多巴胺能神经元标志物TH和Fproteins的表达均显著升高。
3.3AngⅡ通过DAF-2/DAF-16通路增强NSCs的自噬活动
采用免疫印迹检测发现，AngⅡ处理组DAF-2/DAF-16通路的表达均显著升高。同时，采用免疫荧光和免疫印迹检测自噬指标表达情况发现，AngⅡ处理组中NSCs自噬活动显著增强，表现为LC3、Beclin-1的表达升高，p62和ATG5的表达降低。
四、讨论
本文结果表明，AngⅡ可以促进NSCs向多巴胺能神经元的分化。这主要是由于AngⅡ促进了NSCs内HAS的表达，进而促进NSCs向中脑多巴胺能神经元的分化。同时，AngⅡ还可以通过DAF-2/DAF-16通路增强NSCs的自噬活动，从而进一步促进NSCs的神经元分化。
透明质酸酶是一种合成和分泌透明质酸的关键酶，透明质酸又是多巴胺能神经元的主要成分之一，因此AngⅡ调控NSCs的HAS表达是促进其向多巴胺能神经元分化的重要机制之一。DAF-2/DAF-16通路是调节内源性抗氧化系统和自噬的重要途径，AngⅡ对该通路的调节可以增强NSCs自噬活动，从而促进神经元的分化。
在实际应用中，本文结果为利用AngⅡ促进NSCs向多巴胺能神经元的定向分化提供了一种新途径，可为神经系统疾病的治疗提供新的思路和方法。
五、结论
本文研究结果表明，血管紧张素Ⅱ可以通过促进NSCs内透明质酸酶的表达和增强DAF-2/DAF-16通路下NSCs的自噬活动，促进NSCs向中脑多巴胺能神经元的分化。这一发现为NSCs向多巴胺能神经元的定向分化提供了新途径，为神经系统疾病的治疗提供新的思路和方法。