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超声辐照载维拉帕米微泡对神经母细胞瘤多药耐药的逆转作用研究
绪论
神经母细胞瘤（neuroblastoma）是一种常见的儿童恶性肿瘤，占所有儿童肿瘤的约7%。多药耐药是神经母细胞瘤治疗困难的主要原因之一，导致局部复发和远处转移。因此，开发新的治疗手段来逆转神经母细胞瘤的多药耐药性成为当前研究的热点之一。
载维拉帕米（verapamil）是一种钙通道阻滞剂，已被证明可以逆转多种肿瘤细胞的多药耐药（MDR）现象。有研究表明，载维拉帕米通过抑制肿瘤细胞内P-糖蛋白（P-gp）的表达来实现逆转MDR的作用。P-gp是一种ABC转运蛋白，参与细胞内药物转运，是肿瘤细胞多药耐药的主要机制之一。
而微泡则是一种特殊的胶束结构，其直径在1-10微米之间，能通过超声辐照制备。超声辐照可以在微泡的表面形成射流和喷雾，使微泡与药物合并，从而可以有效地将药物输送到瘤细胞内部。同时，超声辐照对肿瘤细胞的膜结构造成的直接或间接影响也能够抑制肿瘤细胞的生长，甚至可以促进肿瘤细胞的凋亡。
本文旨在探讨超声辐照载维拉帕米微泡对神经母细胞瘤多药耐药的逆转作用，为神经母细胞瘤的治疗提供新思路和新方法。
方法
实验分为以下几步：
1.预处理神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH，分别用PBS缓冲液、载维拉帕米、载维拉帕米微泡和超声辐照载维拉帕米微泡处理。
2.细胞增殖实验：利用MTT法检测神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株不同组的细胞增殖情况，计算细胞抑制率。
3.流式细胞术：用荧光染料DCFH-DA标记细胞中的活性氧（ROS），采用流式细胞仪检测细胞中ROS的表达水平。
4.Real-timePCR法检测细胞中P-gp基因的表达水平，并用免疫荧光染色法验证P-gp蛋白的表达。
结果
1.载维拉帕米微泡和超声辐照载维拉帕米微泡组对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株的增殖有明显的抑制作用，并且抑制作用更明显。
2.载维拉帕米微泡和超声辐照载维拉帕米微泡组能够明显提高细胞内ROS的表达水平，并且超声辐照载维拉帕米微泡组对ROS的增加作用更强。
3.Real-timePCR分析表明，P-gp基因的表达水平在载维拉帕米和载维拉帕米微泡组和超声辐照载维拉帕米微泡组中均有明显下降，而在超声辐照载维拉帕米微泡组下降幅度更大。P-gp蛋白的免疫荧光染色结果也验证了此结论。
讨论
本实验结果表明，载维拉帕米微泡和超声辐照载维拉帕米微泡对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株的增殖有明显的抑制作用，并且能够明显提高细胞内ROS的表达水平。这两种处理方式同时也能够明显降低细胞内P-gp基因的表达水平，从而实现对多药耐药的逆转作用。
微泡具有高渗透性和高吸附能力，可以在细胞坏死和凋亡处停留较长时间，增加药物在肿瘤细胞内的滞留时间。此外，超声辐照的应用还可以促进肿瘤细胞凋亡和细胞膜通透性的改变，从而增强载维拉帕米的逆转多药耐药作用。
结论
本研究结果表明，在超声辐照的条件下，载维拉帕米微泡能够逆转神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株对多种药物的耐药性，从而实现有效的抗肿瘤治疗。这一研究为神经母细胞瘤的治疗提供了新思路和新方法，值得进一步深入研究。