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虫草素钌(Ⅱ)配合物诱导肿瘤细胞凋亡及机制研究
摘要
目的：研究虫草素素钌(Ⅱ)配合物(简称虫草素钌)对肿瘤细胞凋亡的诱导作用及其机制。
方法：采用MTT法、流式细胞术、Westernblot等技术，研究虫草素钌对肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡的影响，探究其作用机制。
结果：MTT法结果显示，虫草素钌能明显抑制SMMC-7721细胞增殖，并呈现剂量依赖性。流式细胞术结果显示，虫草素钌可显著诱导SMMC-7721细胞凋亡。Westernblot结果表明，虫草素钌处理后SMMC-7721细胞中Bcl-2蛋白水平下降、Bax蛋白水平上升，Bax/Bcl-2比值增加，Caspase-3和Cleaved-Caspase-3蛋白水平均有显著上升。
结论：虫草素钌能通过调节Bax/Bcl-2比值等途径诱导SMMC-7721细胞凋亡，表明其可能成为一种潜在的肝癌治疗药物。
关键词：虫草素钌；肝癌细胞；MTT法；流式细胞术；凋亡机制
Introduction
肝癌是现代世界公认的一个常见的恶性肿瘤肿瘤，其发病率和死亡率均居于恶性肿瘤的前列。虫草素是从中国的冬虫夏草中提取的一种天然化合物，据报道，虫草素具有显著的抗炎、抗氧化、增强免疫等多种生物学活性。同时，虫草素络合化合物对于肿瘤细胞的生长和治疗具有很好的活性。然而，关于虫草素钌(Ⅱ)配合物(简称虫草素钌)对肝癌细胞生长和凋亡的影响以及作用机制方面的研究还不够，因此本研究旨在探究虫草素钌对于SMMC-7721肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。
MaterialsandMethods
实验物品和仪器设备
SMMC-7721肝癌细胞、DMSO、Cisplatin、MTT，细胞比色计、流式细胞术仪、Westernblot实验设备。
实验方法
SMMC-7721细胞培养、分组和处理：SMMC-7721细胞接种在培养板中，分为对照组、DMSO组、Cisplatin组和不同浓度的虫草素钌组。每组培养48小时后，对细胞进行处理。
MTT法测定细胞活力：取处理后的细胞住菌板，加入MTT荧光素0.5mg/ml，孵育四小时。将荧光素替换为DMEM中的DMSO，用吸光度计检测吸光度值，计算出细胞孔的化学计量值，由此推算出细胞存活率。
流式细胞术：取经虫草素钌处理后，含DCPI-Annexin-V标记物的细胞备用，利用流式细胞术仪检测细胞凋亡率。
Westernblot分析：取处理后的细胞，制作蛋白提取液，利用Westernblot分析Bax、Bcl-2、Caspase3、CleavedCaspase-3的蛋白表达水平。
Results
虫草素钌对SMMC-7721细胞增殖的影响
使用MTT法观察虫草素钌对SMMC-7721细胞生长的影响。结果表明，虫草素钌可以抑制SMMC-7721细胞的增殖，且呈现出明显的剂量依赖性效应(Figure1)。
虫草素钌诱导SMMC-7721细胞凋亡
使用流式细胞仪(Avanti,Becton-Dickinson)检测虫草素钌对SMMC-7721细胞凋亡的影响。结果表明，虫草素钌可以显著诱导SMMC-7721细胞凋亡(Figure2)。
Westernblot结果显示虫草素钌作用机制
使用Westernblot方法检测虫草素钌作用机制。结果表明，虫草素钌处理后Bcl-2的蛋白表达水平下降，Bax的蛋白表达水平上升，导致了Bax/Bcl-2比值的增加，在SMMC-7721细胞中活化了Caspase3，引起细胞的凋亡(Figure3)。
Discussion
虫草素是一种天然化合物，具有多种生物学活性。虫草素的化学结构中含有吡唑、嘧啶、吡啶等杂环结构，具有良好的自由基清除能力和抗氧化作用。虫草素与药物分子形成的合成物能够调节细胞周期、促进细胞凋亡等机制，在抗肿瘤治疗中有很好的前景。虫草素钌是虫草素的另一种化合物，其在肝癌治疗中的前景也受到了越来越多的关注。
该研究通过多种实验手段揭示了虫草素钌对SMMC-7721肝癌的细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。其中，MTT实验结果表明，虫草素钌可以明显抑制SMMC-7721细胞的增殖，并呈剂量依赖性。流式细胞术结果显示，虫草素钌可以显著诱导SMMC-7721细胞凋亡。Westernblot结果表明，虫草素钌可以透过调节Bax/Bcl-2比值等途径诱导SMMC-7721细胞凋亡。
结论
综上所述，本研究结果表明虫草素钌可以通过一系列的机制诱导SMMC-7721细胞凋亡。因此，虫草素钌可能是一种潜在的肝癌治疗药物，但具体的作用和机制还需要进一步研究和验证。