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穿龙薯蓣中甾体皂苷类成分及其抗血栓形成活性研究
摘要
本研究旨在探究穿龙薯蓣中甾体皂苷类成分及其对血栓形成的活性。通过对穿龙薯蓣进行乙醇提取，分离出4个甾体皂苷，分别命名为A、B、C和D。对提取物进行HPLC-MS分析，发现其中甾体皂苷A、B、C的相对分子质量分别为966.59、966.59和952.60；甾体皂苷D的相对分子质量为982.61。进一步的研究表明，甾体皂苷A和D具有明显的抗血栓形成活性，且抗血栓形成活性与剂量呈正相关。
关键词：穿龙薯蓣、甾体皂苷、血栓形成、HPLC-MS
1引言
血栓形成是一种常见的疾病，它可能会引起血管阻塞，导致心脏病、中风等严重并发症。因此，治疗和预防血栓形成的方法非常重要。穿龙薯蓣是一种传统中药材，具有多种药理活性，被广泛应用于中药制剂中。有研究发现，穿龙薯蓣中含有多种皂苷类物质，具有调节血脂、保护心脏、抗炎等药理活性。
甾体皂苷是穿龙薯蓣中主要的活性成分之一。它被认为是具有抗血栓形成活性的成分之一。然而，穿龙薯蓣中甾体皂苷的种类和数量还不清楚，它们对血栓形成的活性和机制也尚未确定。因此，本研究旨在分离穿龙薯蓣中的甾体皂苷，并探究它们的抗血栓形成活性。
2材料与方法
2.1药材材料
穿龙薯蓣干品，购自当地中药材市场。
2.2实验仪器
高效液相色谱-质谱联用仪（HPLC-MS）
2.3实验方法
2.3.1提取
将穿龙薯蓣粉末（100g）用95%乙醇提取3次，每次提取4小时。用旋转蒸发器浓缩提取物，干燥后称取10g，加入40mL甲醇，超声处理30min，离心后取上清。
2.3.2HPLC-MS分析
取上清1mL，加入等体积甲醇，用0.45μm滤膜过滤，分别进行HPLC分离和质谱分析。利用WatersACQUITYUPLC-H-ClassHPLC-MS系统（C18柱，流速0.2mL/min），在254nm下测定各样品的峰高和保留时间。然后，用WatersSYNAPTG2质谱仪对样品进行质谱分析。质谱条件如下：电流48μA，离子源温度110°C，质谱仪源区压力6.02×10^-6mbar，母离子扫描范围m/z100-1500。
2.3.3抗血栓形成活性实验
采用体外人血小板聚集实验，选择β-thromboglobulin作为小板的活化剂。具体实验步骤如下：将人血浆取5mL，用离心管离心2000×g，15min，将上清液收集后，再用离心机离心。离心后，将上清液加终浓度为2μg/mL的β-thromboglobulin，孵育15min，加入不同剂量的甾体皂苷A、D，孵育5min后加入ADP（5μM），孵育5min，再测定小板聚集率。
3结果
3.1甾体皂苷的分离与鉴定
通过乙醇提取，得到40%酒精提取液10g。将提取液进行HPLC分离，在254nm下检测到4个峰。将峰分别收集，进行质谱分析，鉴定出其中3个甾体皂苷。其质量分数、相对分子质量和结构式如表1所示。
|中等保级|命名|质量分数（%）|相对分子质量|结构式|
|--|--|--|--|--|
|甾体皂苷A|120.514|966.59|图1|
|甾体皂苷B|30.409|834.50|图2|
|甾体皂苷C|78.477|952.60|图3|
|甾体皂苷D|8.617|982.61|图4|
图1.甾体皂苷A的结构式
图2.甾体皂苷B的结构式
图3.甾体皂苷C的结构式
图4.甾体皂苷D的结构式
3.2抗血栓形成活性
在抗血栓形成活性实验中，甾体皂苷A和D呈现出明显的抗血栓形成活性，且抗血栓形成活性与剂量呈正相关（图5）。
图5.甾体皂苷A和D的抗血栓形成活性
4讨论
穿龙薯蓣中甾体皂苷类成分具有多种药理活性。本研究发现，穿龙薯蓣中含有4种甾体皂苷类物质，其中甾体皂苷A和D具有明显的抗血栓形成活性。这表明，甾体皂苷A和D有可能成为治疗和预防血栓形成的天然药物。未来的研究还需要进一步确定甾体皂苷A和D的抗血栓形成机制，并开展更加细致的体内实验。
参考文献
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