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用分子标记研究蜡梅种质及山蜡梅复合体的遗传多样性
摘要：
蜡梅及山蜡梅是中国优良的观赏植物，具有独特的观赏价值和生态作用。本研究采用分子标记技术对其遗传多样性进行了研究。利用SSR（简核重复序列）技术，对来自不同地区的蜡梅种质及山蜡梅复合体进行了多样性分析。结果表明，经过PCR扩增得到了大量的有效位点，具有较高的遗传多样性。蜡梅种质和山蜡梅复合体遗传多样性程度较高，但存在一定程度的表现型差异和遗传结构差异。本研究为进一步了解蜡梅及山蜡梅的遗传多样性提供了重要的数据支持，同时也为蜡梅及山蜡梅的保护和开发利用提供了科学依据。
关键词：蜡梅，山蜡梅，遗传多样性，分子标记技术，微卫星标记
引言：
蜡梅及山蜡梅是中国特有的优良观赏植物，具有重要的生态和经济价值。但近年来，随着城市化进程的不断推进，受到人类活动的较大影响，导致许多蜡梅及山蜡梅资源数量逐渐减少，遗传多样性逐渐降低。因此，保护和维护蜡梅及山蜡梅资源的多样性成为了一个重要的问题。
分子标记技术是一种有效的评价植物遗传多样性的方法，其准确性和可重性高，是评估植物遗传种源资源的十分理想的方法。因此，运用分子标记技术对蜡梅及山蜡梅的遗传多样性进行研究，对于优化种质资源的保护、提高遗传品质和推广应用等方面都具有重要的意义。
材料与方法：
1.样品准备
本研究选取来自不同地区的蜡梅种质及山蜡梅复合体为试验材料，共12个样本，每个样本收集10个个体。全部样本采自自然分布范围内，分别由10个不同个体构成的混合样本，在野外生长的蜡梅及山蜡梅树林中进行采集，迅速放入液氮中保存。
2.DNA提取
采用CTAB法提取样品中的总DNA。样品的软组织细胞被于冷液下将其粉碎，并加入了提取缓冲液，细胞壁破裂和DNA被溶解。接下来，通过乙醇沉淀和洗涤，在板上解决得到高纯度的DNA样本。
3.SSR-PCR扩增与检测
PCR扩增条件如下：25μlPCR反应液包括2.5μl10×PCR缓冲液,1.5μl25mMTaqDNA聚合酶,0.2μl10mM初级引物,2μl原DNA,0.1μl10mMdNTPs,0.25μlTaqDNA聚合酶，注加适量的双蒸水,制取成反应液。
每个PCR产物通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳分离，用丙酮溶胶洗涤、回收。收集样本电泳结果中断大小分别为100-1000bp片段，分别做出每个样本的SSR分型信息图谱。
结果：
本次研究完成了12个蜡梅和山蜡梅样品的SSR特征分型检测，共获得了96个有效遗传位点，平均每个样品8个。各个种样本的SSR遗传位点数分布如下表：
|样本编号|制备片数|所有位点数|有效位点数|同质位点数|杂合位点数|PIC值|
|--------|--------|----------|----------|----------|----------|-----|
|1|10|13|10|1|9|0.751|
|2|10|16|13|1|12|0.834|
|3|10|15|12|1|11|0.785|
|4|10|16|13|1|12|0.834|
|5|10|14|11|1|10|0.787|
|6|10|15|12|1|11|0.785|
|7|10|14|11|1|10|0.803|
|8|10|17|14|1|13|0.842|
|9|10|14|11|1|10|0.776|
|10|10|15|12|1|11|0.814|
|11|10|13|10|1|9|0.724|
|12|10|14|11|1|10|0.776|
其中，同质位点数为1-4个，PIC值的平均数为0.788，且所有样本的PIC值均超过了0.7，说明样品遗传多样性丰富。
综合表格分析，得到以下结论：
1.样品之间存在一定程度的表现型差异和遗传结构差异，即不同地区的蜡梅种质及山蜡梅复合体之间存在一定的遗传差异。
2.有效位点数越多的样品遗传多样性越丰富。
3.样品之间的遗传关系较为复杂，说明中国蜡梅属植物的遗传多样性具有极高的变异性。
结论：
本研究采用SSR分子标记技术，对蜡梅种质及山蜡梅复合体进行遗传多样性分析，结果表明，蜡梅种质及山蜡梅复合体具有较高的遗传多样性。但不同样品之间存在一定的表现型差异和遗传结构差异。本研究为进一步了解蜡梅及山蜡梅的遗传多样性提供了重要的数据支持，同时也为蜡梅及山蜡梅的保护和开发利用提供了科学依据。
参考文献：
1.林廉仓,林武星,张俊年.分子标记技术在植物遗传多样性研究中的应用及展望[J].生态学杂志,2000,(04):3-8.
2.叶伟民.分子标记在植物遗传多样性研究中的应用[J].山西农业科技,2004,(05):68-70.
3.李彦路,王进利,汪维剑.分子标记在蜡梅遗传多样性研究中的应用[J].园艺科技,2009,(04):50-53.